細梗香草兩個主要抗腫瘤活性皂苷成分的藥代動力學(xué)研究.pdf

1、報春花科（Primulaceae）珍珠菜屬（Lysimachia）植物細梗香草（Lysimachia capillipes Hemsl.），又名滿山香、香排草。民間用于治療感冒咳嗽、風(fēng)濕痹痛等。細梗香草主要以黃酮和三萜類皂苷為主要化學(xué)成分，其中細梗香草皂苷 B（capilliposide B，LC-B）和細梗香草皂苷C（capilliposide C，LC-C）為主要皂苷類成分。前期藥理學(xué)研究表明，以LC-B和LC-C為主要成分的細梗香

2、草總皂苷提取物，可有效抑制荷瘤裸鼠腫瘤生長。體外實驗證明，LC-B和LC-C對多種腫瘤細胞具有顯著的細胞毒作用，具有很好的開發(fā)和利用價值。然而，LC-B和LC-C在生物體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄性質(zhì)仍然未知。因此，本課題擬對細梗香草中兩種主要成分LC-B和LC-C展開體內(nèi)外藥代動力學(xué)研究，為進一步開發(fā)和利用細梗香草，提供數(shù)據(jù)參考。
　　1. LC-B和LC-C大鼠體內(nèi)藥物動力學(xué)研究
　　建立同時測定大鼠血漿中LC-B和LC

3、-C濃度的LC-MS/MS方法。敵敵畏作為穩(wěn)定劑可以有效防止分析物結(jié)構(gòu)中酯鍵被大鼠血漿或者全血中的酯酶水解。通過LC-QTRAP-MS/MS初步表征LC-B和LC-C血漿中代謝產(chǎn)物為其水解產(chǎn)物L(fēng)C-A。大鼠體內(nèi)的藥物動力學(xué)結(jié)果表明，LC-B和LC-C經(jīng)口給藥后大鼠體內(nèi)暴露量很低，生物利用度較差。
　　2. LC-C體外腸道菌群代謝及其代謝產(chǎn)物活性研究
　　用體外腸道菌群代謝方法，92.7％的 LC-C轉(zhuǎn)化為其代謝產(chǎn)物。結(jié)合U

4、HPLC-QTOF-MS/MS定性分析與細胞存活率分析，快速表征6種LC-C腸道菌群代謝產(chǎn)物，并證明LC-C腸道菌群代謝產(chǎn)物組對HepG2、PC-3和A549細胞具有明顯的外抗腫瘤活性。
　　3. LC-B和LC-C主要代謝產(chǎn)物L(fēng)C-A的制備及體外活性研究
　　采用氫氧化鈉堿水解方法制備 LC-B和LC-C的酯鍵水解產(chǎn)物 LC-A。通過質(zhì)譜、核磁方法結(jié)合參考文獻鑒定水解產(chǎn)物L(fēng)C-A。HPLC-ELSD檢測LC-A純度為98.

5、2%。在體外抗腫瘤實驗中，LC-A有效抑制HepG2細胞增殖，IC50為17.46±1.55μg/mL。
　　4. LC提取物中LC-B和LC-C及主要代謝產(chǎn)物L(fēng)C-A體內(nèi)外代謝研究
　　用大鼠肝微粒體和人肝微粒體體外孵育方法，研究 LC-B、LC-C和代謝物L(fēng)C-A代謝穩(wěn)定性。結(jié)果表明LC-B、LC-C和代謝物L(fēng)C-A在大鼠肝微粒體和人肝微粒體中代謝穩(wěn)定，提示 CYP450酶并不是三個化合物的主要代謝酶。用UHPLC-QT

6、RAP-MS/MS方法表征小鼠經(jīng)口給與LC提取物10天后，血漿、尿液和糞便中的代謝產(chǎn)物。共檢測到21個代謝產(chǎn)物。血漿和尿液樣品中主要以酯鍵水解和去糖基化代謝為主。糞便樣品中代謝物種類較多，除酯鍵水解和去糖基化代謝外，還檢測到Ⅰ相代謝產(chǎn)物。
　　5. LC-B靜脈給藥和LC提取物經(jīng)口給藥小鼠組織分布研究
　　建立同時測定小鼠各組織中LC-A、LC-B和LC-C濃度的LC-MS/MS方法。LC-B靜脈給藥后，分布于除骨骼肌外各組

7、織中，肝、脾和肺組織分布濃度較高。代謝產(chǎn)物L(fēng)C-A主要在肝和腸組織分布。LC提取物經(jīng)口給藥10天后，主要活性成分LC-B和LC-C分布于各組織當(dāng)中，代謝產(chǎn)物L(fēng)C-A主要分布于胃和腸組織中。
　　6. LC-B在大鼠體內(nèi)排泄研究
　　建立同時測定大鼠尿液和糞便中LC-A和LC-B濃度的LC-MS/MS方法。采用SPE柱處理尿液和糞便樣品。CHAPS作為抗吸附劑，加入到尿液樣品中可以有效防止分析物被吸附。1%甲酸調(diào)節(jié)尿液pH，有