具有抑菌活性土壤拮抗放線菌C3-11菌株的篩選研究.pdf

1、本文采用高氏一號培養(yǎng)基從貴州、重慶、河南和云南等省份的土樣中分離純化出200株放線菌菌株，采用抑制菌絲生長速率法對其發(fā)酵液進行了活性菌株的篩選研究。共篩選出5株活性較好的放線菌菌株作為候選菌株，主要研究結(jié)果如下：
　　(1)采用稀釋法對采自貴州、重慶、河南、云南等省份的土樣進行菌株的分離純化，共純化出200株菌株。對純化出的菌株進行搖瓶發(fā)酵，以小麥赤霉病菌(Fusarium graminearum)、玉米大斑病菌(Exserohi

2、lum turcicum)和油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)為指示菌用抑制菌絲生長速率法對200株菌株的發(fā)酵液進行室內(nèi)生物活性初篩，篩選結(jié)果表明，共發(fā)現(xiàn)5株活性較好的放線菌菌株，它們依次是C3-2、C3-4、C3-11、N-7和N-10。這5株放線菌的發(fā)酵液對油菜菌核病菌的抑制率均達(dá)到85％以上，說明抑菌效果較好。
　　(2)對C3-2、C3-4、C3-11、N-7和N-10菌株的發(fā)酵液進行室內(nèi)抑菌

3、譜的測定。抑制菌絲生長速率法生測結(jié)果表明，5株放線菌的發(fā)酵液對12種病原真菌均有一定的抑制作用，對油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)和黃瓜灰霉病菌(Botrytis cinerea)的抑制率都達(dá)到了80％以上，C3-2、C3-4、C3-11菌株發(fā)酵液對油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、黃瓜灰霉病菌(Botrytis cinerea)、小麥赤霉病菌(Fusarium grami

4、nearum)、交鏈孢病菌(Alternaria alternate)、玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)、馬鈴薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)、半夏立枯病菌(Rhizoctonia solani)和萵苣黑斑病菌(Stemphylium chisha)的抑制率均達(dá)到了50％以上。其中C3-11菌株發(fā)酵液的抑菌效果最好。故以下研究重點以C3-11菌株為主要候選菌株。管蝶法對大腸桿菌(Escheric

5、hia coli)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)三種病原細(xì)菌測定結(jié)果顯示，5株放線菌菌株的發(fā)酵液均無明顯的抑制細(xì)菌的作用。
　　(3)菌株分子生物學(xué)鑒定表明，C3-11菌株屬于鏈霉菌屬。16S rDNA序列分析證明C3-11菌株與鏈霉菌中的龜裂鏈霉菌(Streptomyces rimosus)的核苷酸有99％的同源性；經(jīng)典分類法鑒定發(fā)現(xiàn)，C3-11

6、菌株在培養(yǎng)特征和生理生化特性方面與龜裂鏈霉菌(Streptomyces rimosus)存在一定的差異，推斷C3-11菌株可能是龜裂鏈霉菌(Streptomyces rimosus)的一個近緣種，暫定名為Streptomyces sp. C3-11。(4)以油菜菌核病菌為指示菌，對C3-11菌株的發(fā)酵液進行穩(wěn)定性穩(wěn)定性研究以及發(fā)酵條件的初步優(yōu)化。穩(wěn)定性研究結(jié)果表明C3-11菌株發(fā)酵液對光照、溫度及酸都有良好的穩(wěn)定性，自然光照60 d抑菌

7、活性為93.6％、80°C處理1 h抑菌活性依然保持在87.8％、在pH2-6的1 mol/L的HCl溶液中處理后與原始發(fā)酵液相比均無明顯變化；但對堿的穩(wěn)定性稍差一些，當(dāng)pH為12時抑菌活性僅為60.8％。對C3-11菌株發(fā)酵條件初步優(yōu)化結(jié)果表明菌株的最適發(fā)酵條件為種子發(fā)酵2 d后，以10％接種量接入pH為7的裝有100 mL小米液體發(fā)酵培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中，發(fā)酵5-6 d，發(fā)酵液的抑菌活性最好。
　　(5)對 C3-11