降糖三黃片對(duì)糖尿病腎病大鼠TLR4-NF-κB信號(hào)通路的研究.pdf

1、文獻(xiàn)研究:
　　糖尿病腎病與消渴病日久并發(fā)的“下消”、“腎消”等相關(guān)。病因與先天稟賦不足、飲食不節(jié)、房勞過(guò)度、情志失調(diào)等因素有關(guān)，病機(jī)以脾胃虧虛、腎陰不足為本，以燥熱、痰飲、水濕、瘀血、濁毒為標(biāo)。治療以補(bǔ)腎健脾，滋陰清熱為大法，佐以化痰利水、活血化瘀、瀉濁通腑之法。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為糖尿病腎病的發(fā)生涉及多種因素，如晚期糖基化終末產(chǎn)物蓄積、蛋白激酶C活化、多元醇通路激活、脂代謝紊亂、高血壓、細(xì)胞因子等。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究表明炎癥反應(yīng)在

2、糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制中占據(jù)重要地位，TLR4/NF-κ B通路是介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的重要信號(hào)通路，TLR4能激活NF-κB，增加炎癥因子的表達(dá)，促進(jìn)糖尿病腎病的進(jìn)展。降糖三黃片是以桃核承氣湯加減研制而成的院內(nèi)制劑，具有益氣養(yǎng)陰，活血化瘀，瀉熱通腑的功效，在防治糖尿病腎病方面具有一定療效。
　　實(shí)驗(yàn)研究:
　　目的:
　　探究降糖三黃片對(duì)糖尿病腎病大鼠腎組織TLR4/NF-κ B信號(hào)通路的影響，觀察由TLR4/NF-κ B信號(hào)

3、通路誘導(dǎo)的MCP-1的表達(dá)，探討降糖三黃片對(duì)糖尿病腎病的保護(hù)作用及機(jī)制。
　　方法:
　　80只SPF級(jí)SD大鼠經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按隨機(jī)數(shù)字表分為正常組10只，造模組70只。造模前大鼠需禁食12小時(shí)，不禁水，造模組按45mg/kg劑量腹腔內(nèi)注射STZ，正常組腹腔內(nèi)注射等量的檸檬酸緩沖液。造模72小時(shí)后，測(cè)大鼠空腹血糖，若血糖值＞16.7mmol/L，確認(rèn)為糖尿病模型。正常組大鼠給予普通飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，造模組大鼠給予高糖高脂飼

4、料進(jìn)行喂養(yǎng)，繼續(xù)喂養(yǎng)3周。3周后測(cè)尿液，尿量＞原尿量的150％、24小時(shí)尿蛋白＞30mg/24h，則確認(rèn)為糖尿病腎病模型。糖尿病腎病模型造模成功的大鼠按隨機(jī)數(shù)字表進(jìn)一步分為模型組12只、降糖三黃片低劑量組11只、降糖三黃片中劑量組11只、降糖三黃片高劑量組11只、厄貝沙坦組11只。降糖三黃片低劑量組按675mg/kg·d的劑量灌胃，降糖三黃片中劑量組按1350mg/kg·d的劑量灌胃，降糖三黃片高劑量組按2700mg/kg·d的劑量灌胃

5、，厄貝沙坦組按13.5mg/kg·d的劑量灌胃，灌胃前藥物均用純凈水配成2ml混懸液，每日1次灌胃，連續(xù)8周。正常組及模型組灌服等量蒸餾水。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)共62只大鼠完成實(shí)驗(yàn)，其中正常組10只，模型組9只，降糖三黃片低劑量組10只，降糖三黃片中劑量組11只，降糖三黃片高劑量組11只，厄貝沙坦組11只。分別在造模72小時(shí)后及治療前測(cè)大鼠尾尖空腹微量血糖。治療前及治療8周后收集24h尿液測(cè)尿蛋白。治療8周后，每只大鼠予腹腔注射10％水合氯醛麻醉

6、，腹主動(dòng)脈取血，檢測(cè)空腹血糖、糖化血紅蛋白、總甘油三脂、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、血肌酐、血尿素氮等指標(biāo)。免疫組化法檢測(cè)各組腎組織中TLR4、NF-κ B(p65)、MCP-1蛋白的分布，Western blot法檢測(cè)各組腎組織中TLR4、NF-κ B(P-p65)、MCP-1蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.治療8周后降糖三黃片低、中、高劑量組空腹血糖與模型組相比顯著下降（P＜0.01）;厄貝沙坦組

7、空腹血糖與模型組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組相比，降糖三黃片低、中、高劑量組糖化血紅蛋白均明顯下降（P＜0.01）;厄貝沙坦組糖化血紅蛋白與模型組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。降糖三黃片低、中、高劑量組TG、TC、LDL-C與模型組相比顯著降低(P＜0.01)。降糖三黃片低、中、高劑量組HDL-C與模型組相比顯著升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。厄貝沙坦TG、TC、LDL-C、HDL-C與模型組相比，差異無(wú)

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組相對(duì)腎重與模型組相比顯著減輕（P＜0.01）。治療8周后，降糖三黃片低、中、高劑量組及厄貝沙坦組24h尿蛋白與模型組相比顯著減少（P＜0.05)。治療8周后，降糖三黃片高劑量組24h尿蛋白與厄貝沙坦組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組血肌酐、血尿素氮與模型組相比顯著降低(P＜0.05)。降糖三黃片高劑量組血肌酐、血尿素氮與厄貝沙坦組相

9、比顯著降低(P＜0.01)。
　　2.TLR4、NF-κ B(p65)免疫組化染色結(jié)果顯示，降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組TLR4平均光密度值與模型組相比顯著降低（P＜0.05)。降糖三黃片高劑量組TLR4平均光密度值與厄貝沙坦組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組NF-κ B(p65)平均光密度值與模型組相比顯著降低（P＜0.01)。降糖三黃片高劑量組NF-κB(p65)平均光密度值與

10、厄貝沙坦組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05）。Western blotting法檢測(cè)TLR4、NF-κ B(p65)蛋白表達(dá)顯示，降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組與模型組相比TLR4蛋白表達(dá)量顯著下降（P＜0.01）。降糖三黃片高劑量組TLR4蛋白表達(dá)量與厄貝沙坦組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組NF-κ B(P-p65)蛋白表達(dá)量與模型組相比顯著降低（P＜0.01）。降糖三黃片高劑量組NF-

11、κ B(P-p65)蛋白表達(dá)量與厄貝沙坦組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　3.MCP-1免疫組化染色結(jié)果顯示，降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組MCP-1平均光密度值與模型組相比顯著降低（P＜0.05)。降糖三黃片高劑量組MCP-1平均光密度值與厄貝沙坦組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。Western blotting法檢測(cè)MCP-1蛋白表達(dá)顯示，降糖三黃片低、中、高劑量組、厄貝沙坦組MCP-1蛋白表達(dá)量與模型組相