丹蛭降糖膠囊調(diào)節(jié)JAK-STAT-SOCS信號通路改善糖尿病腎病的研究.pdf

1、研究表明Janus激酶/信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄活化因子(Janus kinase/signal transducerand activator of transcription，JAK/STAT)介導的生長因子和炎癥因子的信號途徑在糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN)中發(fā)揮了重要作用，細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制蛋白(suppressor of cytokine signaling，SOCS)調(diào)控腎臟JAK/STAT信號從而防

2、止其過度活化。本研究用體外培養(yǎng)的小鼠系膜細胞(mesangial cell，MES)，以及糖尿病大鼠模型，研究丹蛭降糖膠囊（Danzhi Jiangtang Capsule，DJC）對晚期糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGEs)誘導JAK/STAT/SOCS信號通路的調(diào)節(jié)作用，進一步探討DJC對糖尿病大鼠腎臟保護作用的機制，為DJC的臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　方法:MTT法檢測DJ

3、C對AGEs誘導MES增殖的影響，確定DJC的作用濃度和時間;ELISA法檢測白介素-6(interleukin-6，IL-6)水平;Western blot法檢測MES JAK2/STAT1，3/SOCS1，3信號通路蛋白以及環(huán)氧合酶(Cyclooxygenas2，C OX2)的表達。通過高脂飲食結(jié)合小劑量STZ多次腹腔注射復制DM大鼠模型，選擇血糖高于16.7mmol·L-1大鼠隨機分為模型組（DM組）、DJC低、高劑量組（DJC-

4、L組:600mg·kg-1，DJC-H組:2000mg·kg-1），每組7～8只;正常對照組(Ctrl組)和DM組給予等量蒸餾水灌胃。連續(xù)給藥八周后，血糖儀檢測空腹血糖(fastingblood-glucose，F(xiàn)BG)，大鼠取血處死，分離血清檢測血脂、腎功能、氧化指標;腎臟稱重并計算腎臟指數(shù);留腎組織標本固定做HE、PAS染色以及免疫組化。ELISA法檢測腎皮質(zhì)勻漿中炎癥因子IL-6水平;Western blot法測腎組織中JAK2/

5、STAT1，3/SOCS1，3信號通路蛋白以及COX2的表達。
　　結(jié)果:
　　1.根據(jù)MTT結(jié)果選取0.125、0.5、2mg·mL-13個濃度，12、24、48h3個時間為后續(xù)實驗DJC的處理濃度和時間。結(jié)果表明，AGEs刺激48h后IL-6分泌顯著增加，COX2表達增強，p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1、p-STAT3/STAT3以及SOCS3蛋白的表達水平增強(P＜0.05)，而SOCS1表達增加不

6、明顯，DJC能降低COX2蛋白表達和IL-6的分泌，使p-STAT1/STAT1、p-STAT3/STAT3及SOCS3蛋白表達下降(P＜0.05)，但對SOCS1表達無明顯影響。
　　2.DM組FBG、血脂、腎臟指數(shù)、氧化指標均高于Ctrl組，腎功能降低，光鏡下腎小球體積增大，腎小囊腔變大，腎組織IL-6水平顯著增高，COX2、p-STAT1/STAT1、p-STAT3/STAT3以及SOCS3蛋白的表達水平增強(P＜0.05)

7、，DJC治療組血脂水平、IL-6降低，但對FBG影響不明顯，腎功能明顯提高，腎組織病理改變亦明顯減輕，大鼠腎組織p-STAT1/STAT1、p-STAT3/STAT3、SOCS3表達下降，SOCS1變化不明顯。
　　結(jié)論:
　　1.DJC主要通過調(diào)節(jié)腎小球系膜細胞JAK2/STAT3/SOCS3信號通路從而保護AGEs誘導的炎癥損傷。
　　2.DJC主要通過調(diào)節(jié)腎組織JAK2/STAT3/SOCS3信號通路從而保護DN