蛋白激酶B在全氟辛烷磺酸致肝細胞胰島素抵抗中的作用研究.pdf

1、目的：全氟辛烷磺酸（PFOS）是一種持久性有機污染物，其對環(huán)境的污染問題已引起了廣泛關注。流行病學研究表明PFOS與胰島素抵抗的發(fā)病有關，但具體分子機制尚不明確。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)PFOS可激活人肝HepG2細胞自噬過程。由于細胞自噬激活劑雷帕霉素可通過抑制哺乳動物雷帕霉素復合物2（mTORC2）引起胰島素抵抗，而 mTORC2可調(diào)節(jié)蛋白激酶 B（AKT）磷酸化，并影響其下游靶基因如磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）的表達，最終降低

2、細胞對胰島素的敏感性，但PFOS是否通過此途徑引起細胞的胰島素抵抗還不清楚。因此，本研究擬探討PFOS誘導胰島素抵抗過程中AKT的作用。
　　方法：用MTT實驗和乳酸脫氫酶（LDH）釋放實驗檢測PFOS對HepG2細胞存活率的影響；用胰島素誘導的葡萄糖攝取評估細胞胰島素敏感性；用油紅 O染色評價細胞內(nèi)甘油三酯水平；用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）檢測AKT和mTOC2蛋白表達水平，用Western blot和免疫熒光

3、染色法檢測p-AKT的蛋白表達水平；用RT-qPCR檢測AKT的靶基因PEPCK mRNA的相對表達水平。
　　結果：250μM~300μMPFOS處理細胞24 h，細胞存活率顯著下降。在后續(xù)實驗選擇的濃度范圍100μM~200μM，PFOS未表現(xiàn)出明顯細胞毒性。100μM~200μM處理24h后的細胞，胰島素刺激的葡萄糖攝取呈劑量依賴性下降。油紅 O染色結果表明100μM~200μM處理HepG2細胞24h后，細胞中甘油三酯含量