LncRNA-MIAT在TNF-α介導(dǎo)的血管炎癥中的表達(dá)及作用.pdf

1、目的：體外觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞（endothelial cells，ECs）和血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）在腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）刺激下，細(xì)胞內(nèi)長鏈非編碼RNA心肌梗死相關(guān)轉(zhuǎn)錄本(long non-coding RNA myocardial infarction associated transcript，LncRNA-MIAT)的表

2、達(dá)變化，并探討LncRNA-MIAT對(duì)ECs和VSMC炎癥的調(diào)控作用。
　　方法：以TNF-α誘導(dǎo)ECs和VSMC炎癥狀態(tài),采用Western Blot、PCR及qRT-PCR方法分別檢測(cè)ECs和VSMC炎癥狀態(tài)下細(xì)胞間黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）、血管細(xì)胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）和LncRN

3、A-MIAT的表達(dá)情況。應(yīng)用LncRNA-MIAT的小干擾核糖核酸(siRNA MAIT)轉(zhuǎn)染ECs和VSMC,觀察LncRNA-MIAT敲低對(duì)ICAM-1和VCAM-1表達(dá)的影響。通過劃痕實(shí)驗(yàn)，觀察ECs和VSMC的遷移功能。
　　結(jié)果：1.①內(nèi)皮細(xì)胞PCR結(jié)果：與空白對(duì)照相比，加入lncRNA-MIAT引物的條帶明顯，提示ECs中表達(dá)LncRNA-MIAT，不同引物濃度的條帶亮度的比較差異不明顯，提示當(dāng)引物濃度增加時(shí)，LncR

4、NA-MIAT表達(dá)量增加不明顯。②平滑肌細(xì)胞PCR結(jié)果：與空白對(duì)照相比，加入lncRNA-MIAT引物的條帶明顯，提示VSMC中表達(dá)LncRNA-MIAT，不同引物濃度的條帶亮度的比較差異不明顯，提示當(dāng)引物濃度增加時(shí)，LncRNA-MIAT表達(dá)量增加不明顯。2.①內(nèi)皮細(xì)胞qRT-PCR結(jié)果：隨著TNF-α刺激時(shí)間延長和刺激濃度增高，LncRNA-MIAT表達(dá)呈逐漸上升趨勢(shì)。TNF-α刺激24 h、48 h其他刺激時(shí)長比較，lncRNA-

5、MIAT表達(dá)量增多；TNF-α刺激濃度1.000 ng/ml、10.000 ng/ml與其他刺激濃度比較，lncRNA-MIAT表達(dá)量均增多，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②平滑肌細(xì)胞qRT-PCR結(jié)果：隨著TNF-α刺激時(shí)間延長和刺激濃度增高，LncRNA-MIAT表達(dá)呈逐漸上升趨勢(shì)。刺激12 h、24 h、48h其他刺激時(shí)長比較，lncRNA-MIAT表達(dá)量增多；刺激濃度10.00 ng/ml、20.000 ng/ml與其他刺激濃度比較，l

6、ncRNA-MIAT表達(dá)量均增多，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.①內(nèi)皮細(xì)胞RNA干擾結(jié)果：siRNA MAIT48h與siRNA Scramble比較，lncRNA-MIAT表達(dá)量明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；siRNA MAIT48 h與siRNA MAIT24 h相比，lncRNA-MIAT表達(dá)量下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②平滑肌細(xì)胞RNA干擾結(jié)果：siRNA MAIT24h與siRNA Scramble比較，lncRNA-MIAT表達(dá)

7、量明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；siRNA MAIT48 h與siRNA Scramble比較，lncRNA-MIAT表達(dá)量明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.①內(nèi)皮細(xì)胞中ICAM-1的Western Blot結(jié)果：濃度為1.000 ng/ml的TNF-α刺激ECs后，ICAM-1的表達(dá)與空白對(duì)照相比顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。應(yīng)用siRNA MAIT轉(zhuǎn)染ECs48 h后，應(yīng)用濃度為1.000 ng/ml TNF-α刺激ECs后，與陽性對(duì)

8、照相比，ICAM-1表達(dá)量被明顯抑制,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與空白對(duì)照相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②內(nèi)皮細(xì)胞中VCAM-1的Western Blot結(jié)果：濃度為1.000 ng/ml的TNF-α刺激ECs后，VCAM-1的表達(dá)與空白對(duì)照相比顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。應(yīng)用siRNA MAIT轉(zhuǎn)染ECs48 h后，應(yīng)用濃度為1.000 ng/ml TNF-α刺激ECs后，與陽性對(duì)照相比，VCAM-1表達(dá)量被明顯抑制,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與空白對(duì)照相

9、比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③平滑肌細(xì)胞中ICAM-1的Western Blot結(jié)果：濃度為10.00 ng/ml的TNF-α刺激VSMC后，ICAM-1的表達(dá)與空白對(duì)照相比顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。應(yīng)用siRNA MAIT轉(zhuǎn)染VSMC48 h后，應(yīng)用濃度為10.00 ng/ml TNF-α刺激VSMC后，與陽性對(duì)照相比，ICAM-1表達(dá)被抑制,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與空白對(duì)照相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.①內(nèi)皮細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果：濃度為1.000

10、 ng/ml TNF-α刺激ECs培養(yǎng)24h后，與空白對(duì)照相比，ECs遷移距離延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。siRNA MAIT敲低后的ECs加入濃度為1.000 ng/mlTNF-α刺激ECs培養(yǎng)24h后，與空白對(duì)照相比，ECs遷移明顯被抑制，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②平滑肌細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果：濃度為10.00 ng/mlTNF-α刺激VSMC培養(yǎng)24h后，與空白對(duì)照相比，細(xì)胞遷移距離明顯延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。siRNA MAIT敲低后的VSMC