HBV mRNA通過抑制let-7a促進(jìn)肝癌的發(fā)生.pdf

1、肝細(xì)胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是全世界發(fā)病率位列第五的癌癥。乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)慢性感染是肝癌發(fā)生的一個(gè)主要的病因，研究發(fā)現(xiàn)病毒蛋白因子（如病毒X蛋白HBx、S蛋白HBs等）、慢性炎癥、病毒基因整合到宿主染色體等均可誘導(dǎo)HCC發(fā)生，HBV慢性感染引發(fā)HCC的機(jī)制仍有待深入研究，這對(duì)于發(fā)現(xiàn)治療乙肝慢性感染引起的肝細(xì)胞癌的新靶標(biāo)具有重要意義。近期我們提出了競(jìng)爭(zhēng)性病毒RNA

2、s(competitivevirusRNAs，cvRNAs)的概念:HBVmRNAs和宿主mRNAs之間擁有共同的miRNA結(jié)合序列，HBVmRNAs通過共享的miRNA反應(yīng)元件與相應(yīng)的宿主mRNAs競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合感染細(xì)胞中的miRNAs池，導(dǎo)致HBVmRNAs可能直接調(diào)控相應(yīng)宿主mRNAs的水平。鑒于HBV感染過程中通常通過共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(covalentlyclosedcircularDNA，cccDNA)表達(dá)大量冗余的mRNA，預(yù)

3、期病毒與宿主細(xì)胞mRNA之間存在直接調(diào)控關(guān)系，這可能在HCC發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用。
　　本研究中，主要探討大量表達(dá)的HBVmRNAs能否通過調(diào)節(jié)共享的miRNA，上調(diào)宿主中具有相同miRNA結(jié)合位點(diǎn)的基因的表達(dá)，分析該過程是否參與HCC的發(fā)生。Let-7a是高度保守的let-7家族成員之一，我們選擇let-7a是因?yàn)樗歉闻K中預(yù)測(cè)的同時(shí)靶向C型和D型HBV轉(zhuǎn)錄本的宿主miRNAs中豐度最高的miRNA之一，而且它在HBV相關(guān)的

4、肝細(xì)胞癌中水平顯著下調(diào)。首先，通過基因表達(dá)譜分析HBVmRNA調(diào)節(jié)的miRNAs及宿主mRNA表達(dá)譜，我們發(fā)現(xiàn)HBVpre-C/CmRNA上調(diào)多種let-7a靶點(diǎn)。隨后，通過軟件預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)在HBVpre-C/C、pre-S和SmRNAs的第86至108位堿基處有一個(gè)let-7a的結(jié)合位點(diǎn)，并通過結(jié)合位點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)和雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)加以證實(shí)。在HBV轉(zhuǎn)染和感染的肝細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)HBVmRNAs對(duì)let-7a的隔離和抑制作用，而且在HB

5、V感染的單個(gè)肝細(xì)胞中HBVmRNA水平遠(yuǎn)高于let-7a的水平，提示病毒mRNA可有效作用于let-7a，而且HBVmRNAs對(duì)let-7a的這一作用依賴于let-7a反應(yīng)元件。進(jìn)一步的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)一旦病毒mRNA表達(dá)，與AGO2結(jié)合的let-7a靶基因(例如c-myc、K-RAS和CCR7)顯著減少，提示let-7a對(duì)其靶基因及其信號(hào)通路的抑制作用也隨之解除。同時(shí)，在HBV感染的HCC患者中也發(fā)現(xiàn)let-7a的水平不僅明顯下調(diào)，而且與

6、肝臟內(nèi)的pre-S2mRNA水平呈負(fù)相關(guān)。最后，體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均證明HBV對(duì)let-7a的抑制作用可促進(jìn)肝細(xì)胞克隆形成和肝腫瘤生長(zhǎng)，這為查明HBVmRNAs直接參與致癌作用提供了依據(jù)。
　　綜上所述，我們的研究表明，HBVmRNAs通過let-7a反應(yīng)元件依賴的模式吸附和隔離let-7a，從而解除let-7a對(duì)其靶基因(例如c-myc、K-RAS和CCR7)的抑制作用，進(jìn)而在HCC發(fā)生發(fā)展中起著促進(jìn)肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和生長(zhǎng)的作用。鑒于