let-7f-5p通過FNDC3B和MMP11抑制胃癌的轉(zhuǎn)移.pdf

1、【背景】
　　我國是胃癌高發(fā)區(qū)，在我國胃癌的發(fā)病率和死亡率在所有腫瘤中均居第二位，數(shù)據(jù)顯示新發(fā)腫瘤患者中有74％發(fā)生在亞洲，其中約半數(shù)發(fā)生在我國。胃癌的死亡率一直居高不下，其中胃癌轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致胃癌患者死亡和治療失敗的主要原因，而轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)室前期通過研究對兩株轉(zhuǎn)移能力不同的胃癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞系進(jìn)行microRNA芯片分析，發(fā)現(xiàn)多個(gè)可抑制胃癌轉(zhuǎn)移的miRNA，其中以let-7f抑制胃癌轉(zhuǎn)移作用最為顯著。
　　【目的】

2、
　　研究let-7f-5p與胃癌轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系；篩選并驗(yàn)證let-7f-5p的下游靶基因；探究let-7f-5p靶基因與胃癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系。
　　【方法】
　　1、通過qRT-PCR的方法檢驗(yàn)let-7f-5p在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)，轉(zhuǎn)染let-7f-5p的類似物及抑制物通過transwell實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)let-7f-5p對胃癌轉(zhuǎn)移的影響；
　　2、通過生物信息學(xué)預(yù)測的方法預(yù)測 let-7f-5p的靶基因，并運(yùn)用qRT-P

3、CR、雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)及Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證let-7f-5p與其靶基因的調(diào)控關(guān)系；
　　3、通過免疫組化和實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證let-7f-5p靶基因在胃癌及癌旁組織之間的表達(dá)，通過轉(zhuǎn)染靶基因的小干擾RNA對靶基因進(jìn)行功能研究，通過Western blot檢驗(yàn)干擾let-7f-5p靶基因?qū)ζ渌匾肿油返鞍姿降挠绊憽?br>　　【結(jié)果】
　　一，let-7f-5p與胃癌轉(zhuǎn)移成負(fù)相關(guān)關(guān)系。我們在胃

4、癌高低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系MKN28M、MKN28NM中驗(yàn)證了let-7f-5p在胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系中低表達(dá)，在胃癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系中高表達(dá)；在高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系MKN28M中轉(zhuǎn)染let-7f-5p的類似物使其上調(diào)，在低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系MKN28NM細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染let-7f-5p的抑制物使let-7f-5p下調(diào)，通過tanswell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)let-7f-5p與胃癌細(xì)胞的遷移能力和侵襲能力呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。
　　二，F(xiàn)NDC3B和MMP11為let-7f

5、-5p的靶基因，且let-7f-5p與 FNDC3B mRNA的3’-UTR直接結(jié)合。我們通過生物信息學(xué)預(yù)測的方法使用4個(gè)生物信息學(xué)預(yù)測軟件（CLIP-Seq, miRanda, PicTar和TargetScan）預(yù)測let-7f-5p的靶基因，發(fā)現(xiàn)FNDC3B與MMP11的3’-UTR上有與let-7f-5p結(jié)合位點(diǎn)，而且通過文獻(xiàn)回顧發(fā)現(xiàn)FNDC3B與MMP11與轉(zhuǎn)移相關(guān)；我們通過雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)和 Western blot驗(yàn)

6、證了let-7f-5p通過與FNDC3B mRNA的3’-UTR直接結(jié)合從而下調(diào)FNDC3B，通過Western blot驗(yàn)證了MMP11可能為let-7f-5p的下游靶基因。
　　三，F(xiàn)NDC3B可抑制胃癌的粘附、轉(zhuǎn)移，且其可影響EMT分子和MMP家族的表達(dá)。我們使用小干擾RNA技術(shù)使FNDC3B下調(diào)，通過細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)下調(diào)FNDC3B的表達(dá)可抑制胃癌細(xì)胞的粘附、遷移和侵襲能力，通過western bl

7、ot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)下調(diào)FNDC3B可抑制MMP分子的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)FNDC3B可上調(diào)viminten的表達(dá)。
　　【結(jié)論】
　　1,let-7f-5p的表達(dá)與胃癌轉(zhuǎn)移負(fù)相關(guān)。
　　2,FNDC3B和MMP11是let-7f-5p的靶基因，而且let-7f-5p通過與FNDC3B的3’-UTR區(qū)直接結(jié)合從而下調(diào)FNDC3B的表達(dá)。
　　3,下調(diào)FNDC3B的表達(dá)可抑制胃癌的粘附、遷移和侵襲能力，且下調(diào)FNDC3B可抑制M