腹腔穿刺引流對重癥急性胰腺炎腸道細菌移位及屏障功能影響的研究.pdf

1、目的:
　　重癥急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis，SAP)是臨床上常見的急腹癥，其發(fā)病急，進展快，并發(fā)癥多，預后差，死亡率高達15-30％。以往的研究表明，腸道屏障功能損傷在SAP疾病進展中扮演著重要角色。腸道屏障功能損傷可導致細菌及內毒素移位進入血液及淋巴循環(huán)，進而造成胰腺組織繼發(fā)感染及多器官功能衰竭(Multiple Organ Failure，MOF)。因此，保護腸道屏障功能已經(jīng)成為臨床治療SA

2、P的一種重要的治療措施。然而，目前其主要治療方法如早期腸內營養(yǎng)、應用益生菌及抗生素等效果均不理想，因此，尋找一種有效的治療策略成為臨床上亟待解決的問題。
　　眾所周知，SAP發(fā)生時可產(chǎn)生胰腺炎相關性腹水(Pancreatitis Associated Ascitic Fluid,PAAF)，業(yè)已證實PAAF含大量的炎性介質如細胞因子、胰酶等，可損傷腸粘膜屏障功能，對SAP病情的發(fā)展起著推動作用。因此，認為尚若盡早干預PAAF這一環(huán)

3、節(jié)，可能對SAP患者的病情及預后有改善作用?；诖耍瑘F隊針對SAP患者早期行腹腔穿刺引流(Abdominal Paracentesis Drainage，APD)治療引流出腹腔內PAAF，通過回顧性分析大量臨床病例資料，表明該策略不但可明顯改善胰腺炎患者病情及預后，還降低了SAP患者死亡率。隨后，通過動物實驗，我們進一步證實了APD不但可明顯提高SAP大鼠生存率，而且對SAP相關性肺損傷及脂質代謝紊亂均有改善作用[8-10]。雖然基于A

4、PD策略的SAP治療取得了這些進展，然而針對其發(fā)揮的有效作用及機制的認識還比較初步，尚需進一步研究。例如，APD對腸道細菌移位是否有作用？APD對腸屏障功能損傷是否會發(fā)揮有益的作用？
　　基于以上分析，本研究擬通過綠色熒光蛋白(Green Fluorescent Protein，GFP)標記的大腸桿菌(Escherichia coli，E.coli)，觀察APD對SAP大鼠腸道細菌移位的作用規(guī)律;然后，通過組織學、Elisa和免疫

5、組織化學方法研究APD對SAP大鼠腸屏障功能損傷的作用。
　　方法:
　　1.模型制備:首先使用抗生素對將SD大鼠進行腸道準備，之后連續(xù)3天喂養(yǎng)質粒標記有GFP的E.coli(E.coli marked with Green Fluorescent Protein，GFP-E.coli)。待其成功定植于大鼠腸道后，將大鼠分為假手術(Sham operation，Sham)組、SAP組和APD組，每組30只。胰膽管注射?；悄懰?/p>

6、鈉制備SAP大鼠模型。術中右下腹留置腹腔引流管法為APD。假手術組僅開腹后翻動胰腺數(shù)次后即關腹。
　　2.胰腺炎死亡率及嚴重程度的觀察與檢測:24小時后觀察三組大鼠死亡率、腹水量，并在無菌條件下手術取材并處死大鼠。蘇木素和伊紅(Hematoxylin And Eosin，HE)染色法對三組大鼠胰腺組織進行病理學評分;ELISA法測定血清C反應蛋白(C-reaction protein，CRP)、腫瘤壞死因子(Tumor Necro

7、sis Factor-α，TNF-α)及白細胞介素β（Interleukin-1β，IL-1β）水平，血清內毒素水平。
　　3.細菌移位情況檢測:血液、腸系膜淋巴結(Mesenteric Lymph Node，MLN)及胰腺組織經(jīng)細菌培養(yǎng)后，使用熒光顯微鏡觀察細菌移位程度并計算細菌移位率。
　　4.腸屏障功能的檢測:HE染色法對三組大鼠小腸組織進行病理學評分，ELISA法測定血清(intestinal Fatty Acid

8、Binding Protein，iFABP)、二胺氧化酶(Diamine Oxidase，DAO)及D-乳酸水平，免疫組織化學法檢測小腸粘膜緊密連接蛋白閉鎖小帶(Zona Occludens，ZO-1)的表達情況。
　　結果:
　　1.胰腺炎嚴重程度:1.1死亡率與腹水Sham組大鼠未見死亡，APD組大鼠死亡率明顯低于SAP組，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。Sham組大鼠未見腹水，APD組大鼠腹水量明顯少于SAP組，差異

9、有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。1.2胰腺組織病理學評分與Sham組比較，SAP組、APD組胰腺組織病理學評分明顯升高(p＜0.05);與SAP組比較，APD組胰腺組織病理學評分明顯降低(p＜0.05)。1.3血清CRP、TNF-α及IL-1β水平與Sham組比較，SAP組及APD組血清CRP、TNF-α、IL-1β水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);與SAP組比較，APD組血清CRP、TNF-α、IL-1β水平明顯降低，差異

10、有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　2.細菌移位情況:2.1細菌移位Sham組大鼠血液、MLN及胰腺組織均未發(fā)現(xiàn)細菌移位，Sham組、SAP組及APD組血液均未發(fā)現(xiàn)細菌移位;SAP組和APD組MLN和胰腺組織出現(xiàn)細菌移位，而APD組明顯低于SAP組，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。2.2內毒素移位與Sham組比較，SAP組及APD組血清內毒素水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);與SAP組比較，APD組血清內毒素水平明

11、顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)
　　3.腸屏障功能情況:3.1小腸組織病理學評分與Sham組比較，SAP組、APD組小腸組織病理學評分明顯升高(p＜0.05);與SAP組比較，APD組小腸組織病理學評分明顯降低(p＜0.05)。3.2血清i-FABP、DAO及D-乳酸水平與Sham組比較，SAP組及APD組血清i-FABP、DAO及D-乳酸水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);與SAP組比較，APD組血清i-F

12、ABP、DAO及D-乳酸水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。3.3小腸粘膜緊密連接蛋白ZO-1的表達情況與Sham組比較，SAP組及APD組緊密連接蛋白ZO-1表達明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);與SAP組比較，APD組緊密連接蛋白ZO-1表達明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　結論:
　　1.APD明顯降低了SAP炎癥反應和死亡率。
　　2.APD顯著改善了腸道細菌及內毒素移位。