基于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與Wnt-β-catenin信號(hào)通路研究蛇床子素對(duì)成骨細(xì)胞增殖與分化的影響及機(jī)制.pdf

1、背景:骨質(zhì)疏松癥是由體內(nèi)骨吸收-骨形成耦聯(lián)失衡引起的代謝性骨病，其治療著眼于恢復(fù)骨代謝平衡。蛇床子素被證實(shí)具有抗骨質(zhì)疏松的藥理作用，但其抗骨質(zhì)疏松的機(jī)制尚不清楚。
　　目的:觀察蛇床子素對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖與分化的影響，探討蛇床子素抗骨質(zhì)疏松的機(jī)制。
　　方法:通過(guò)改良酶消化法及反復(fù)貼壁純化法從新生大鼠顱骨中獲取原代成骨細(xì)胞;通過(guò)光鏡下形態(tài)觀察、堿性磷酸酶染色、茜素紅法礦化結(jié)節(jié)染色等方式鑒定成骨細(xì)胞。采用CCK-8法篩選出10

2、-6M、10-5M、10-4M作為低、中、高濃度蛇床子素組，以10-8Mβ-雌二醇作為陽(yáng)性對(duì)照組，0.25％DMSO作為溶劑對(duì)照組，最后設(shè)立空白組排除DMSO對(duì)成骨細(xì)胞的干擾。本研究采用CCK-8法測(cè)定成骨細(xì)胞增殖能力、偶氮偶聯(lián)法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶表達(dá)、茜素紅染色法測(cè)定成骨細(xì)胞礦化能力以及酶聯(lián)免疫法測(cè)定骨鈣素分泌量，從不同角度、不同階段檢測(cè)蛇床子素對(duì)成骨細(xì)胞分化的影響。并通過(guò)檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志分子GRP78、PDI、CHOP以及Wnt

3、/β-catenin信號(hào)通路的Wnt、β-catenin蛋白的表達(dá)來(lái)分析蛇床子素影響成骨細(xì)胞增殖和分化的機(jī)制。
　　結(jié)果:10-4M的蛇床子素可以抑制成骨細(xì)胞增殖，10-5M的蛇床子素在給藥72h后也會(huì)抑制成骨細(xì)胞增殖;10-4M的蛇床子素可以促進(jìn)成骨細(xì)胞表達(dá)，10-5M蛇床子素組在給藥48h后成骨細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶也開(kāi)始提高;各濃度蛇床子素均可以促進(jìn)成骨細(xì)胞骨鈣素的分泌和礦化結(jié)節(jié)形成，其中10-4M的蛇床子素效果最強(qiáng);各濃度蛇床素

4、均可以降低GRP78表達(dá)，尤以10-4M濃度最為顯著，而PDI的表達(dá)與蛇床子素的濃度呈正相關(guān)，其中10-4M濃度蛇床子素可以增加PDI表達(dá)，CHOP的表達(dá)只在10-4M濃度組檢測(cè)到;Wnt1蛋白在10-4M及10-5M組表達(dá)增加，而β-catenin只有10-4M組升高。
　　結(jié)論:蛇床子素可通過(guò)提高Wnt1蛋白水平來(lái)促進(jìn)β-catenin介導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖與分化，但是高濃度蛇床子素過(guò)強(qiáng)的促分化能力會(huì)通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑造成成骨細(xì)胞