基于Sirt1-p53介導的凋亡通路探討牡荊苷拮抗酒精性肝損傷的保護作用.pdf

1、酒精性肝病(ALD)是指由于酒精消耗誘導出現(xiàn)肝細胞損傷。目前，由于其發(fā)病率和死亡率逐年上升，且臨床上尚無有效藥物治療的特點，越來越受到全世界的學者關注。
　　肝細胞凋亡是參與酒精性肝損傷發(fā)病的一種重要機制。研究表明Sirt1可能是治療ALD的一個重要靶點，其下游的p53對調(diào)控線粒體介導的凋亡通路至關重要。文獻表明，牡荊苷有良好的抗凋亡活性。因此，基于以上理論，本課題提出“牡荊苷通過激活Sirt1，抑制p53表達及解除其乙?；瑥亩?/p>

2、抑制由酒精誘導的肝細胞凋亡，改善酒精性肝損傷”的科學假設，研究牡荊苷對酒精性肝損傷的保護作用及其機制，為酒精性肝損傷的治療提供實驗依據(jù)。
　　目的:
　　以不同濃度的乙醇誘導小鼠急性、亞急性酒精性肝損傷，初步評估牡荊苷拮抗小鼠急性、亞急性酒精性肝損傷的藥效，考察牡荊苷干預后對小鼠酒精性損傷后的肝臟中Sirt1/p53介導的凋亡通路的影響，包括Sirt1、p53、Bcl-2、Bax、caspase3的mRNA和蛋白。然后以LO

3、2細胞系為模型，從體外層面進一步考察牡荊苷對LO2細胞的保護作用及機制。
　　方法:
　　一、牡荊苷拮抗小鼠急性、亞急性酒精性肝損傷動物實驗
　　（一）牡荊苷預防小鼠急性酒精性肝損傷的實驗
　　雄性KM小鼠隨機分為正常組、模型組、水飛薊素組(80mg/kg)、牡荊苷低、中、高劑量組(20、40、80mg/kg)。按上述劑量單次給藥，1h后，以4.8g/kg bw的乙醇誘導小鼠急性酒精性肝損傷。檢測指標:肝臟系數(shù)、

4、血清中AST、ALT、TC、TG含量。
　　（二）牡荊苷治療小鼠亞急性酒精性肝損傷的實驗
　　動物分組、給藥劑量同上。第一周，除正常組外，上午每組給予30％的乙醇，按10ml/kg灌胃造模;下午給予不同濃度的牡荊苷和水飛薊素治療。第二周起，逐步上調(diào)乙醇造模濃度，第二、第三、第四周的造模濃度分別為為40％、50％、55％，至第四周造模給藥結束。檢測指標:肝臟系數(shù)、血清中AST、ALT、TC、TG、TP、TBIL、UA含量，肝臟

5、病理切片觀察。
　　二、牡荊苷干預LO2細胞酒精性損傷體外實驗
　　以一定濃度的乙醇誘導LO2細胞損傷，同時給予不同濃度的牡荊苷和水飛薊素，檢測各組細胞的活性及上清AST含量，評估牡荊苷的體外藥效。
　　三、牡荊苷拮抗酒精性肝損傷作用機制研究
　　在體外模型中，以流式細胞儀和熒光細胞成像儀檢測各組細胞凋亡情況，進一步檢測體內(nèi)外模型中Sirt1/p53介導的線粒體凋亡通路相關基因和蛋白的表達。
　　結果:

6、r>　　一、牡荊苷拮抗小鼠急性酒精性肝損傷
　　模型組小鼠肝臟系數(shù)、血清中AST、ALT、TC水平顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），通過單次給予牡荊苷后，肝臟系數(shù)、血清中AST、ALT、TC水平顯著下降(P＜0.05或P＜0.01)。
　　二、牡荊苷拮抗小鼠亞急性酒精性肝損傷
　　模型組小鼠死亡率高，且肝臟系數(shù)、AST、AST/ALT、TC、TG、UA顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），給予牡荊苷治療后，小鼠

7、的肝臟系數(shù)、AST、AST/ALT、TC、TG、UA顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），并在一定程度上改善酒精性肝損傷的病理變化。
　　三、牡荊苷對乙醇損傷LO2細胞的保護作用
　　模型組細胞活性顯著下降（P＜0.01），AST含量顯著上升（P＜0.01），同時給予不同濃度的牡荊苷培養(yǎng)能恢復細胞活性（P＜0.05或P＜0.01），抑制AST的釋放(P＜0.01)。
　　四、牡荊苷對Sirt1/p53介導的線粒體凋亡

8、通路的影響
　　在體內(nèi)外模型中，牡荊苷干預后，Sirt1、Bcl-2表達顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)，ac-p53、p53及其比值、caspase3顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。在體外模型中，牡荊苷能抑制細胞凋亡率（P＜0.05或P＜0.01）。
　　結論:
　　牡荊苷能有效拮抗酒精性肝損傷，其作用可能是通過激活Sirt1，調(diào)控p53的轉(zhuǎn)錄及乙酰化從而介導其下游的線粒體凋亡通路，抑制肝細胞凋亡實現(xiàn)的