栝樓抗腫瘤蛋白的純化及活性研究.pdf

1、栝樓（Trichosanthes kirilowii Maxim）為葫蘆科栝樓屬植物，在我國(guó)主要分布于山東、河南、山西、陜西、江蘇、浙江、安徽、四川、云南等省市。主要以果實(shí)和根部入藥，均是歷史悠久的常用中藥材。瓜蔞，中國(guó)藥典載為栝樓的果實(shí)，主要用來(lái)治療心、肺方面的疾病。天花粉則來(lái)源于栝樓的塊根，主要用于中期引產(chǎn)，主要成分為天花粉蛋白。天花粉蛋白曾在20世紀(jì)70年代在我國(guó)被廣泛使用，但由于其在臨床上容易引起發(fā)熱、休克甚至死亡等過(guò)敏性反應(yīng)，

2、目前臨床上很少使用。國(guó)外一些學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)天花粉蛋白是一種單鏈核糖體失活蛋白，具有抗病毒、抗腫瘤等活性，尤其對(duì)HIV具有很好的抑制效果，因此天花粉蛋白又逐漸引起了人們的關(guān)注，但其毒副作用同樣限制了其臨床使用。目前很多醫(yī)藥工作者開(kāi)始轉(zhuǎn)向于尋找新的具有較低毒副作用的核糖體失活蛋白。本研究從所收集到的不同種質(zhì)資源的栝樓中成功的分離、純化到一種核糖體失活蛋白--Trichosanthrip，并對(duì)其性質(zhì)和抗腫瘤活性進(jìn)行了研究，取得了如下結(jié)果：

3、>　　 1.從14份不同居群栝樓的種子中，采用硫酸銨分級(jí)沉淀、陽(yáng)離子交換色譜和葡聚糖凝膠過(guò)濾色譜成功的純化到了Trichosanthrip，經(jīng)測(cè)定其純度高達(dá)96.6％，產(chǎn)率為1 mg/100g種仁。
　　 2.Trichosanthrip經(jīng)胰酶降解后使用LC-MS/MS分析，發(fā)現(xiàn)Trichosanthrip為AAI_LTSS超級(jí)蛋白質(zhì)家族的一種新蛋白質(zhì)。此類(lèi)蛋白質(zhì)廣泛存在于植物的種子中，是植物種子中的一種自我防衛(wèi)物質(zhì)，具有抗真

4、菌、病毒、細(xì)菌等病原物及抗昆蟲(chóng)的活性。
　　 3.使用MALDI-TOF MS精確測(cè)定Trichosanthrip分子量為10964.717 D；Trichosanthrip具有很好的RNA N-糖苷酶活性和蛋白質(zhì)生物合成抑制活性，對(duì)蛋白質(zhì)生物合成的IC50為1.6 ng/ml。
　　 4.Trichosanthrip能體外抑制s180腫瘤細(xì)胞增殖，使S180 G0/G1期細(xì)胞增加，S期細(xì)胞減少，導(dǎo)致其出現(xiàn)G0/G1期細(xì)

5、胞阻滯現(xiàn)象，其對(duì)S180的IC50為19.91μg/mL。
　　 5.Trichosanthrip能明顯的抑制接種S180昆明種小鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)，在1.5mg/kg·d劑量下，抑瘤率可達(dá)91.36％；在最高劑量1.5 mg/kg·d下，Trichosanthrip對(duì)小鼠的體重、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)幾乎無(wú)影響，其體重和臟器指數(shù)與空白對(duì)照無(wú)明顯變化；且Trichosanthrip對(duì)小鼠的急性毒性很小，LD50為103 mg/kg，且當(dāng)