不同動物膽汁的成分差異分析及對非酒精性脂肪肝的作用研究.pdf

1、目的:
　　本文采用非酒精性脂肪肝大鼠模型，以熊膽粉、豬膽粉、牛膽粉和雞膽粉為干預(yù)手段，比較不同動物膽汁粉對非酒精性脂肪性肝病的療效，并對四種動物膽汁的生物活性成分進(jìn)行質(zhì)譜分析對比，以期對臨床用藥提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1:構(gòu)建動物模型及給藥干預(yù):60只SPF級雄性SD大鼠，平均體重為200±10g，經(jīng)過一周的適應(yīng)性喂養(yǎng)，依據(jù)體重?zé)o差異原則(P＞0.05)隨機(jī)分組:正常對照組大鼠10只、高脂飲食造模組大鼠50只

2、。高脂飲食組又分為模型組10只、熊膽粉干預(yù)組10只、豬膽粉干預(yù)組10只、牛膽粉干預(yù)組10只和雞膽粉干預(yù)組10只。自高脂飼料喂養(yǎng)第七周開始，每天除正常組及模型組使用等體積的生理鹽水灌胃外，分別給不同組大鼠進(jìn)行相對應(yīng)的動物膽汁粉末干預(yù)，持續(xù)治療4周。
　　2:實(shí)驗(yàn)動物取材:末次給藥24小時，禁食8小時候，腹腔注射3％戊巴比妥鈉60mg/kg麻醉，腹主動脈采血，處死，取肝臟，稱重。3000轉(zhuǎn)離心，使血清分離，-20℃保存，備用于血液生物

3、化學(xué)指標(biāo);迅速分離整個肝臟，稱重，取右葉肝組織1×1×1cm3，用4％多聚甲醛（以pH7.4的PBS配制）固定，用于形態(tài)學(xué)觀察。
　　3:指標(biāo)檢測:跟蹤并記載大鼠的一般情況，其中包括大鼠的日?；顒佣取⒚恐芊Q量大鼠體重、查看毛色、飲食量、尿液顏色等。使用全自動生化儀對大鼠血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamic oxalacetic transaminase，AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamate pyruvate transamina

4、se，ALT)、甘油三酯(triglyceride，TG)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein，HDLC)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein，LDLC)、直接膽紅素(direct bilirubin，DBIL)和總膽固醇(total cholesterol，CHOL)8個生化指標(biāo)進(jìn)行檢測。取材時記錄最終體重、肝臟狀態(tài)和

5、肝臟重量。HE染色觀察肝臟的病理組織學(xué)變化。
　　4:HPLC-Q-TOF MS法成分分析:對熊膽粉、豬膽粉、牛膽粉和雞膽粉進(jìn)行成分分析，結(jié)果用保留時間、精確分子量和標(biāo)準(zhǔn)品比對，并用文獻(xiàn)查找的方式，鑒定不同膽汁中的差異成分，結(jié)合四種膽汁粉末對非酒精性脂肪肝的功能差異，分析藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　結(jié)果:
　　高脂飲食制備非酒精性脂肪肝模型會引起大鼠體重的明顯增加（P＜0.01），不同動物膽汁干預(yù)對高脂飲食引起的體重增加有不同

6、的影響。其中，熊膽粉、豬膽粉、牛膽粉能抑制非酒精性脂肪肝大鼠的體重增加（P＜0.05），而雞膽汁干預(yù)對脂肪肝大鼠的體重沒有影響（P＞0.05）;與空白對照組比較，模型組大鼠的肝臟重量有明顯的升高（P＜0.01），而熊膽粉和豬膽粉干預(yù)對模型組大鼠的肝臟重量增加有抑制作用(P＜0.05)，熊膽粉效果更加顯著(P＜0.01)，牛膽粉和雞膽粉的干預(yù)對非酒精性脂肪肝大鼠的肝臟重量無影響（P＞0.05）。此外，牛、熊膽汁可有效緩解高脂飲食誘導(dǎo)的肝臟

7、組織病理學(xué)損傷，如肝腫大、變色、肝細(xì)胞腫脹、脂滴空泡形成等，而豬膽汁和雞膽汁未顯示明顯的治療效果。另外，與正常組比較，模型組大鼠血液的肝功能指標(biāo)均有顯著的升高，包括AST、ALT、TG、DBIL、ALP、LDLC和CHOL，不同動物膽汁干預(yù)能不同程度抑制其生化指標(biāo)的升高。特別是熊膽汁對非酒精性脂肪肝引起的生化指標(biāo)異常改變的療效尤為突出。本研究通過HPLC-Q-TOF MS技術(shù)對不同膽汁的生物活性成分分析發(fā)現(xiàn)，在不同類型的動物膽汁中，以膽

8、酸、?；侨パ跄懰岷腿パ跄懰崛齻€成分為例，其相對含量存在顯著差異。同時，我們在熊膽粉中檢測到一種獨(dú)特的成分，其分子量為496.2738Da，其功能尚未見報道。
　　結(jié)論:
　　本研究結(jié)果表明熊、豬、牛、雞四種動物的膽汁粉末對高脂飲食引起的非酒精性脂肪肝均有不同的治療效果，熊膽粉的綜合療效最為顯著;同時，不同類型動物膽汁的生物活性成分不同，這可能是熊、牛、豬或雞膽汁對非酒精性脂肪肝治療效果不同的原因。而僅在熊膽粉中發(fā)現(xiàn)的一種49