miR-301a在胃癌中的表達及意義和誘導胃癌細胞克隆形成、侵襲和遷移的機制.pdf

1、論文題目：m i R 一3 0 1 a 在胃癌中的表達及其意義和誘導胃癌細胞克隆形成、侵襲和遷移機制答辯委員會主席： 鄭樹森答辯委員會成員： 鄭樹森 浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院張啟瑜 溫州醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院黃東勝 浙江省人民醫(yī)院張勤 浙江省人民醫(yī)院王躍東 浙江大學醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院論文答辯日期：2 0 1 3 年5 月2 1 日溫州醫(yī)學院博士學位論文 m i R - 3 0 l a 在胃癌中的表達及意義和誘導胃癌細胞克隆形成、 侵襲和遷

2、移的初．制 中文摘要 研究背景：在全球，胃癌的死亡率僅次于肺癌居第二位，在我國也是死亡率 最高的惡性腫瘤之一，其5 年生存率低于4 0 ％，早期診斷和治療是提高生存率的 重要手段，因此尋找理想的早期診斷標記物和治療靶點，對改善患者生存率有重 要意義。M i c r o R N A 是一類內源性非編碼的功能性R N A s ，大約2 卜2 5 個核苷酸，它 通過調節(jié)m R N A 的翻譯或降解而起到致癌或抗癌作用。其在腫瘤中的異常表達體

3、現(xiàn)了其與人類腫瘤的形成、發(fā)生、發(fā)展的密切相關，針對m i R N A 與腫瘤的研究充 分體現(xiàn)了m i R N A 參與基因調控的復雜性，它們調控的靶基因關系著腫瘤細胞的分 化、增殖、克隆、侵襲等，因此以m i R N A 為切入點，研究胃癌形成、發(fā)展、浸潤 和轉移過程中的作用及機制，為胃癌早期診斷、預后評估和靶向藥物治療等開辟 了新的途徑。 目的：檢測m i R - 3 0 l a 在人胃癌細胞系( A G S 、M K N 一2 8

4、、B G C 一8 2 3 、H C G 一2 7 、 S G C 一7 9 0 1 和M K N 一4 5 ) 、人正常胃上皮細胞G E S - I 表達，在人胃癌組織的表達及其 臨床病理意義；探討m i R - 3 0 l a 對人胃癌細胞S G C 一7 9 0 1 、H C G 一2 7 細胞克隆、侵 襲和遷移的影響以及對靶基因N F - k B 蛋白表達的調控。 方法：提取人胃癌細胞系( A G S 、M K N 一2 8 、

5、B G C 一8 2 3 、H C G 一2 7 、S G C 一7 9 0 1 和M K N 一4 5 ) 、 人正常胃上皮細胞G E S - I 及2 9 例人胃癌組織及其配對的癌旁非腫瘤胃粘膜組織 的m i I i N A s ，按m i S c r i p t R e v e r s e T r a n s c r i p t i o n K i t 合成c D N A ，m i R - 3 0 l a 、靶 基因N F —k

6、B 和U 6 引物購自Q I A G E N 公司，用A B I 7 5 0 0 F A S T 型熒光定量P C R 儀 進行實時熒光定量P C R 。將5 ．0 ×1 0 5 個細胞／孔接種于6 孔培養(yǎng)板中，3 7 ℃、混 勻，5 ％C 0 2 孵育箱靜置培養(yǎng)2 4 小時。按L i p o f e c t a m i n e 2 0 0 0 說明書將N e g a t i v e C o n t r o l B 和m i

7、R - 3 0 l a 抑制物各2 u l ( 5 0 p m o l ／1 1 1 ) 轉入S G C 一7 9 0 1 和H C G 一2 7 細 胞，轉染2 4 小時后熒光顯微鏡檢測轉染效率、R T —P c R 檢測m i R - 3 0 t a 和靶基因 N 卜k B 的表達水平，并觀察細胞克隆、侵襲和遷移能力。轉染7 2 小時后W e s t e r n B l o t 法檢測靶基醫(yī)N 卜k B 的表達水平。應用原位雜交技術