Syntaxin1B介導(dǎo)的多巴胺受體改變在苯并[a]芘誘發(fā)自主活動興奮中的作用.pdf

1、苯并[a]芘（Benzo[a]pyrene,B[a]P）是環(huán)境中多環(huán)芳烴最為常見的一類化學(xué)污染物，主要通過呼吸道、消化道及皮膚黏膜進(jìn)入人體，長時間的暴露會蓄積在人體組織中。國內(nèi)外研究表明 B[a]P具有神經(jīng)毒性，表現(xiàn)在對新生兒神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育，對兒童注意力缺陷及多動癥等精神疾??；對青少年的學(xué)習(xí)記憶及運(yùn)動；對職業(yè)工人學(xué)習(xí)記憶及神經(jīng)功能等。
　　B[a]P暴露對健康的危害體現(xiàn)在很多方面，慢性B[a]P暴露會對人體多個系統(tǒng)產(chǎn)生異常變化，包括

2、神經(jīng)、呼吸，消化，免疫系統(tǒng)等。與其他組織相比，神經(jīng)細(xì)胞是不可再生細(xì)胞，它對毒物的作用非常敏感。前期人群研究報(bào)道，亞慢性B[a]P暴露對兒童的神經(jīng)系統(tǒng)有損傷作用，體現(xiàn)為腦功能受到抑制，從而導(dǎo)致神經(jīng)組織發(fā)育障礙和智力低下，體現(xiàn)在運(yùn)動行為，認(rèn)知以及學(xué)習(xí)記憶等方面。通過動物實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)染毒組的大鼠步下平臺次數(shù)增多，潛伏期縮短，游泳時間降低。有文獻(xiàn)報(bào)道B[a]P或其代謝物對N-甲基-D天冬氨酸受體產(chǎn)生的影響研究中,表現(xiàn)在腦組織中的海馬、小腦及杏仁核

3、，提示B[a]P及其代謝物對小腦有影響。有研究顯示，小腦負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)肌張力，保持身體平衡和協(xié)調(diào)精細(xì)運(yùn)動等，B[a]P暴露會導(dǎo)致腦組織質(zhì)量低于空白組(P＜0.01)；電鏡下小腦形態(tài)受到損傷，導(dǎo)致小鼠小腦神經(jīng)元損傷。結(jié)合以上結(jié)果推測，小腦可能是B[a]P毒性作用的靶器官。經(jīng)過文獻(xiàn)調(diào)研，發(fā)現(xiàn)鮮有對于B[a]P暴露對小腦影響相關(guān)研究，且B[a]P影響動物運(yùn)動協(xié)調(diào)及自主活動的機(jī)理目前尚不明確。
　　目的：
　　通過對SD幼鼠連續(xù)7周B[a

4、]P灌胃染毒，采用行為學(xué)曠場實(shí)驗(yàn)及足跡實(shí)驗(yàn)，探討B(tài)[a]P亞慢性染毒對SD大鼠自主活動及運(yùn)動協(xié)調(diào)能力的影響，隨后從神經(jīng)遞質(zhì)傳遞過程的角度，探討早期B[a]P暴露引起神經(jīng)行為學(xué)改變的SD大鼠小腦組織上神經(jīng)遞質(zhì)傳遞過程中相關(guān)物質(zhì)變化情況。
　　方法：
　　1、選用5日齡的健康雄性SD大鼠30只，隨機(jī)分為五組，即空白對照組，溶劑組，B[a]P低劑量組(0.02 mg/kg)、中劑量組(0.20 mg/kg)及高劑量組(2.00 m

5、g/kg)；每組各6只；空白對照組不做任何處理，溶劑組灌以等量植物油,B[a]P染毒按照各組染毒劑量灌胃，每天觀察并稱重灌胃一次，連續(xù)灌胃染毒7周。
　　2、采用曠場實(shí)驗(yàn)和足跡實(shí)驗(yàn)，記錄大鼠在曠場實(shí)驗(yàn)中的爬行總格子數(shù)，直立次數(shù)及糞便顆粒數(shù)，及其在足跡實(shí)驗(yàn)中的后跟腳跡軌跡等相應(yīng)指標(biāo)以評價其自主活動及運(yùn)動協(xié)調(diào)能力。
　　3、HE染色觀察小腦組織形態(tài)變化；
　　4、電鏡觀察小腦組織突觸結(jié)構(gòu)及測量突觸間隙變化；
　　5、

6、免疫組化及Western Blot檢測小腦中突觸前膜蛋白Syntaxin1B和神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺DRD1的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、暴露染毒期間，SD幼鼠一般情況良好。染毒結(jié)束后，各染毒組SD大鼠體重均明顯低于空白組（P＜0.05）。
　　2、曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：經(jīng)7周B[a]P暴露，染毒組各組爬行總格子數(shù)及直立次數(shù)較空白組及溶劑組明顯增加（P＜0.05），提示B[a]P暴露促進(jìn)自主活動。足跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，B[a]P暴露4

7、9天后，各組SD大鼠在步寬、步長、步態(tài)變化及角度變化4個參數(shù)指標(biāo)間并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　3、HE染色觀察發(fā)現(xiàn)，各組小腦整體結(jié)構(gòu)良好，能看到正常的葉片和層狀結(jié)構(gòu)。與對照組比較，染毒組小腦組織分子細(xì)胞層未見明顯改變；而小腦浦肯野細(xì)胞層出現(xiàn)PC胞漿染色淡，且不均勻；顆粒細(xì)胞層破壞，寬度明顯縮短，細(xì)胞數(shù)量減少，高劑量組尤為明顯。
　　4、電鏡結(jié)果：B[a]P暴露49天后，與對照組比較，中、高劑量組突觸間隙均增加（P＜

8、0.000）。
　　5、免疫組化結(jié)果顯示檢測到突觸前膜蛋白Syntaxin1B和神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺DRD1在小腦組織有表達(dá)。Western-blot結(jié)果顯示，Syntaxin1B蛋白及DRD1蛋白表達(dá)有增加趨勢。
　　結(jié)論：
　　亞慢性B[a]P暴露后，B[a]P致SD幼鼠在生長發(fā)育中體重下降；促進(jìn)SD大鼠自主活動，但對其運(yùn)動協(xié)調(diào)能力作用不明顯；損害小腦組織中正常形態(tài)；小腦神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺DRD1和突觸前膜蛋白Syntaxi