人源化單抗HP6H8在人紅細胞移植NOD-SCID小鼠模型中的抗惡性瘧藥效評估.pdf

1、瘧疾是當今世界重要的傳染性疾病之一，每年在世界范圍內(nèi)造成數(shù)十萬感染者的死亡，其中絕大多數(shù)是由感染惡性瘧疾引起的。孕婦和兒童是主要的易感人群。瘧原蟲耐藥株尤其是化學藥物耐藥株的出現(xiàn)是消滅瘧疾的主要障礙之一。與此同時，化學藥物所產(chǎn)生的嚴重的不良反應阻礙了孕婦和嬰兒獲得合適的治療方案。抗體藥是抗瘧治療的新策略，瘧原蟲相關蛋白配體與宿主細胞表達的受體蛋白的發(fā)現(xiàn)為其提供了契機。然而瘧原蟲具有種屬特異性，極大地限制了抗體尤其是人源化單克隆抗體的抗瘧

2、藥效評估模型的選擇。在小動物模型中，感染惡性瘧原蟲的人紅細胞移植免疫缺陷小鼠模型成為了一種評估抗瘧藥體內(nèi)藥效的很好的工具，并得到越來越廣泛的認可和應用。
　　在體外實驗中，本實驗室針對受體蛋白CD147研制的人源化單克隆抗體HP6H8對不同株的惡性瘧原蟲都有顯著的抑制效果（該部分實驗由本實驗室張夢瑤博士完成）。但是該抗體在體內(nèi)能否達到同樣的抗瘧效果，仍是一個亟需解決的問題。本研究旨在通過構建感染惡性瘧疾的人紅細胞移植NOD/SCI

3、D小鼠模型來評估人源化單克隆抗體HP6H8的體內(nèi)抗惡性瘧疾的藥效學效果。研究主要由兩部分內(nèi)容組成：
　　第一部分：構建感染惡性瘧原蟲的人紅細胞移植NOD/SCID小鼠模型
　　通過腹腔注射免疫抑制劑，抑制NOD/SCID小鼠體內(nèi)以巨噬細胞為主的先天性免疫反應以及由外源物質(zhì)引起的炎癥反應。采用多次靜脈注射的方法，構建外周血移植人紅血細胞的 NOD/SCID小鼠模型。采用流式細胞技術，檢測人紅細胞移植NOD/SCID小鼠外周血中

4、人紅血細胞的移植率，剔除人紅血細胞移植率過低的小鼠。選用國際標準株3D7，采用單次靜脈注射的方法感染人紅血細胞移植NOD/SCID小鼠。小鼠感染惡性瘧原蟲后，尾靜脈取血制備薄血膜涂片，吉姆薩染色后進行顯微鏡檢觀察小鼠外周血中惡性瘧原蟲生存狀態(tài)。實驗結果顯示，NOD/SCID小鼠外周血中人紅血細胞的移植率可達到80％以上，惡性瘧原蟲能夠在人紅細胞移植小鼠外周血中以0.1%左右的初始原蟲率經(jīng)歷完整的紅細胞內(nèi)期生活周期并且能夠正常增殖，表明我

5、們成功構建了感染惡性瘧原蟲的人紅細胞移植NOD/SCID小鼠模型。
　　第二部分：人源化單克隆抗體HP6H8體內(nèi)藥效評估
　　運用感染惡性瘧原蟲的人紅細胞移植NOD/SCID小鼠模型，進行人源化單克隆抗體HP6H8的體內(nèi)抗惡性瘧疾藥效學評估。依據(jù)外周血人紅血細胞移植率以及給藥前惡性瘧原蟲的感染率，對小鼠進行隨機分組。人紅細胞移植小鼠感染惡性瘧原蟲后，通過靜脈途徑單次注射給藥。每天小鼠尾靜脈取血制備薄血膜涂片，吉姆薩染色后顯微

6、鏡檢觀察各組小鼠外周血中惡性瘧原蟲的生存狀態(tài)。統(tǒng)計結果顯示，人源化單克隆抗體 HP6H8體內(nèi)抑制惡性瘧原蟲的有效濃度為0.948mg/kg；給藥劑量為2mg/kg時，小鼠外周血中的瘧原蟲被完全清除。
　　綜上所述，本研究成功構建了惡性瘧原蟲感染的人紅細胞移植NOD/SCID小鼠模型。本研究成功利用構建的惡性瘧小鼠模型對人源化單抗HP6H8進行體內(nèi)抗惡性瘧疾藥效學評估。本實驗室研制的人源化單抗HP6H8具有顯著的體內(nèi)外抗瘧效果，對其