一種新型人食管癌細(xì)胞系可視化原位移植SCID小鼠模型的建立.pdf

1、目的:建立穩(wěn)定高表達(dá)熒光素酶報(bào)告基因Luc的人食管癌細(xì)胞系,構(gòu)建SCID小鼠皮下及原位移植模型,并采用活體成像技術(shù)監(jiān)測(cè)該細(xì)胞系在SCID小鼠皮下及原位移植模型中生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移情況,成功建立一種新型人食管癌細(xì)胞系可視化原位移植SCID小鼠模型,為抗腫瘤藥物的研發(fā)提供新的有效工具。
　　方法:
　　1、采用lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑盒將質(zhì)粒pcDNA3.1/Luc轉(zhuǎn)染人食管癌細(xì)胞系EC9706,經(jīng)G418抗性篩選及有

2、限稀釋法獲得可穩(wěn)定高表達(dá)熒光素酶的單克隆細(xì)胞系,并通過細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞侵襲性實(shí)驗(yàn)分析轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的生物學(xué)特性有否改變;
　　2、構(gòu)建SCID小鼠皮下移植模型:碘伏消毒小鼠皮膚,將2.0×106個(gè)細(xì)胞注射入小鼠左下腹部皮膚,根據(jù)腫塊的生長(zhǎng)速度,每周測(cè)量2-3次,用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植瘤的長(zhǎng)短徑;
　　3、構(gòu)建SCID小鼠原位移植模型:麻醉小鼠后碘伏消毒小鼠腹部皮膚,在小鼠腹正中做一長(zhǎng)約1cm縱行切口,暴露胃組織,將其向下牽拉見下

3、段食管,將約2.0～4.0×105個(gè)細(xì)胞注射入下段食管外膜下,生物膠封閉針眼,利用活體發(fā)光系統(tǒng)監(jiān)測(cè)移植腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移情況,3周后解剖小鼠,對(duì)皮下腫物、食管原位移植瘤及轉(zhuǎn)移瘤進(jìn)行HE染色,將病理學(xué)結(jié)果與熒光成像的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。
　　結(jié)果:
　　1、構(gòu)建了穩(wěn)定高表達(dá)熒光素酶基因的單克隆細(xì)胞系EC9706-Luc,該單克隆細(xì)胞系具有與親本細(xì)胞系相似的生物學(xué)特性,即細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)方式及生長(zhǎng)速度均與未轉(zhuǎn)染細(xì)胞無(wú)明顯差異;

4、r>　　2、將單克隆細(xì)胞系植入小鼠皮下及食管外膜下,采用活體成像技術(shù)準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)腫瘤細(xì)胞體內(nèi)生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移,其中建立食管原位移植模型4例,2例感染死亡,2例成功建立食管原位移植瘤,監(jiān)測(cè)到腫瘤細(xì)胞發(fā)光;
　　3、皮下移植瘤以及食管原位移植瘤進(jìn)行HE染色后提示皮下移植瘤、食管原位移植瘤均符合鱗狀細(xì)胞癌特征,證實(shí)了活體成像的結(jié)果。
　　結(jié)論:
　　1、利用pcDNA3.1/Luc質(zhì)粒轉(zhuǎn)染食管癌EC9706細(xì)胞可以獲得穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶