口腔鱗狀細胞癌淋巴結轉移新型分子標記物的蛋白質組學研究.pdf

1、目的：基于蛋白質組學研究探索口腔鱗狀細胞癌預測淋巴結轉移的新型分子標記物。
　　方法：⑴差異蛋白篩選實驗方法：選取新鮮冰凍口腔癌組織20例，分淋巴結轉移陽性12例和陰性8例，隨機分組配對，采用二維雙向電泳技術（2-DE），分離兩組表達差異蛋白質位點，基質輔助激光解吸電離串聯飛行時間質譜（MALDI-TOF-TOF MS）鑒定差異蛋白質，并用Mascot數據庫檢索篩選出與淋巴結轉移相關蛋白質。⑵采用免疫組化檢測方法對104例福爾馬林

2、固定石蠟包埋的口腔鱗狀細胞癌組織標本，其中淋巴結移組61例，無淋巴結轉移組43例，檢測差異表達上調蛋白谷胱甘肽轉移酶P(GSTP),14-3-3η蛋白(14-3-3 eta protein),下調蛋白磷酸甘油酸酯激酶1（Phosphoglycerate kinase-1，PGK1）在口腔癌組織中的表達水平以及臨床病理參數間的關系。⑶western blot方法檢測8例新鮮冰凍口腔癌組織中上述蛋白質的表達情況。
　　結果：①差異蛋白

3、篩選實驗采用雙向凝膠電泳技術，共獲得126個差異蛋白點，進行MADLDI-TOF-TOF MS鑒定，及Mascot數據庫檢索篩選出與淋巴結轉移相關蛋白42個，上調蛋白28個；下調蛋白為14個。②從差異蛋白質中篩選出2個上調和1個下調蛋白：GSTP、14-3-3 eta protein和 PGK1對其在組織水平進行驗證。這些蛋白參與多種信號通路調節(jié)細胞增殖、分化、凋亡、轉錄、粘附、血管形成、能量代謝等。③通過免疫組化檢測方法對104例口腔

4、鱗狀細胞癌進行檢測，淋巴結轉移陽性組上調蛋白GSTP、14-3-3 eta和下調蛋白PGK1在口腔癌中表達的陽性率分別為50％（52/104），50.96%（53/104）,44.23%(46/104)；GSTP在口腔癌臨床分期與淋巴結轉移組中差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），在臨床病理參數年齡、腫瘤細胞分化程度中差異比較均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），推測GSTP與口腔鱗狀細胞癌的進展（臨床分期）和淋巴結轉移相關，有望成為預測口腔癌淋

5、巴結轉移的分子標記物。14-3-3 eta與PGK1在口腔癌中的表達與臨床病理參數（性別、年齡、臨床分期、細胞分化程度和淋巴結轉移）間比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；14-3-3 eta蛋白在口腔癌高分化組和中低分化組的陽性率分別為59.26%（16/27）、48.05%(37/77)，臨床分期Ⅰ+Ⅱ期組和Ⅲ+Ⅳ組的陽性率分別為61.76%（21/34）、45.71%（32/70），淋巴結轉移陰性與陽性組的陽性率分別為60.4

6、6%（26/43），44.26%（27/61）。各組間的表達陽性率對比來看，14-3-3 eta蛋白在口腔癌中低分化組，臨床分期Ⅲ+Ⅳ組，淋巴結轉移陽性組中出現表達下調趨勢。由此推測其在口腔癌發(fā)生、發(fā)展中具有一定作用。④8例新鮮冰凍口腔癌組織進行western blot檢測結果顯示在上調蛋白14-3-3 eta和下調蛋白PGk1在淋巴結轉移陽性與陰性組中的表達差異不明顯，GSTP在淋巴結轉移陽性組中表達有升高趨勢。
　　結論：⑴應

7、用2-DIGE結合MALDI-TOF-TOF MS以及通過Mascot數據庫檢索鑒定，對OSCC淋巴結轉移陽性組和陰性組間的表達差異蛋白進行分析，共獲得126個表達差異蛋白位點，篩選出與淋巴結轉移相關蛋白42個，上調蛋白28個，下調蛋白14個，這些蛋白質參與多種信號通路調節(jié)細胞內基因轉錄、蛋白質的翻譯、合成、加工以及細胞自身增殖、分化、凋亡、粘附及血管形成等。⑵通過差異蛋白驗證實驗，我們發(fā)現GS TP在口腔癌中異常表達，與腫瘤的淋巴結轉

8、移呈正相關，有望成為預測口腔癌淋巴結轉移的分子標記物。14-3-3 eta在口腔癌中腫瘤細胞中低分化組、臨床Ⅲ+Ⅳ期組和淋巴結轉移陽性組中表達有下調降低趨勢，其在腫瘤細胞分化、生長、轉移中可能起一定作用。⑶口腔癌的淋巴結轉移是一個多步驟、多因素及各種細胞功能異常所導致的復雜病理的過程，這些差異蛋白質(42個表達差異蛋白)可以從蛋白質通路以及蛋白互作關系的角度篩選更敏感的蛋白，制作蛋白質芯片，引用于臨床，對口腔癌淋巴結轉移的預測具有重要意