川芎嗪對脂多糖誘導急性呼吸窘迫綜合征水通道蛋白1、5表達影響的研究.pdf

1、目的：
　　水通道蛋白是一組與液體平衡有關的細胞膜轉運蛋白，大量證據(jù)表明AQPs與ARDS肺水的代謝和轉運密切相關，其中AQP1和AQP5對維持肺內外液體平衡共同發(fā)揮著重要作用。川芎嗪的有效成分是TMP，研究業(yè)已證實其具有緩解肺水腫的藥理作用，但TMP對肺水腫的改善作用是否與水通道蛋白1、5密切相關，目前尚不清楚。為了證實這一假設，我們通過細胞和動物兩個層面，構建 ARDS的體外和體內模型，觀察川芎嗪對急性呼吸窘迫綜合征非心源性肺

2、水腫的影響，并探討水通道蛋白1、5表達的調節(jié)是否為其作用的可能靶點之一。
　　方法：
　　構建ARDS的體外和體內模型，將A549細胞和SD大鼠隨機分為正常對照組（N組）、TMP處理組(T組)、LPS刺激組(L組)、TMP治療組(LT組)。MTT法檢測細胞體外增殖，實時定量PCR技術（RT-qPCR）檢測各組細胞AQP1、AQP5mRNA水平。通過觀察大鼠的一般情況及動脈血氣分析證實造模是否成功，肺組織病理學改變和濕/干重比

3、驗證肺水腫變化，RT-qPCR檢測各組大鼠肺組織AQP1和AQP5mRNA水平，免疫組化和免疫印跡技術(Western blot)檢測AQP1、AQP5蛋白表達。
　　結果：
　　經MTT法檢測LPS和TMP對A549細胞增殖的影響后,確定LPS的最佳作用濃度為5-10mg/L、TMP的安全范圍為10-50mg/L。觀察大鼠一般情況及動脈血氣分析結果證實尾靜脈注射10mg/kg LPS復制ARDS模型成功，通過肺組織病理改變

4、和濕/干重比觀察到TMP處理組肺水腫緩解。RT-qPCR檢測各組細胞和大鼠肺組織AQP1、AQP5mRNA結果顯示TMP處理組AQP1和AQP5mRNA水平高于對照組(P＜0.05)；而LPS刺激組兩者水平降低(P＜0.05)；同時，與LPS刺激組相比，TMP治療組AQP1、AQP5轉錄水平上升，但低于N、T兩組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。免疫組化和Western blot檢測各組大鼠肺組織AQP1、AQP5蛋白表達情況與mRN