mMARVEL D1在ES細(xì)胞分化中的表達(dá)及其對(duì)EBs形成的影響.pdf

1、胚胎干細(xì)胞(embryonicstem cell)是一類具有多向分化潛能的細(xì)胞,在離體環(huán)境下可被誘導(dǎo)為幾乎所有的生物體組織和器官。因此,胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)也成為研究生物體發(fā)育與遺傳操作的理想材料。已知,ES細(xì)胞在去LIF培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件下可自發(fā)分化形成球狀結(jié)構(gòu)的擬胚體,而其可在一定程度上表現(xiàn)出生物體發(fā)育早期階段的胚胎學(xué)特征,因此,擬胚體的獲得與研究也就成為了研究生物發(fā)育重要手段。
　　本課題為深入認(rèn)識(shí)MARVEL D1基因的功

2、能,研究主要包括兩部分內(nèi)容,分別是鼠源MARVELD1基因(mMARVELD1)在ES細(xì)胞和ES細(xì)胞向擬胚體分化形成過程中的表達(dá)變化及分析該基因?qū)M胚體形成的影響。此項(xiàng)研究為探討mMARVELD1基因在胚胎發(fā)育過程中的生物學(xué)作用奠定了重要基礎(chǔ)。
　　本文首先探討了ES細(xì)胞及ES細(xì)胞向擬胚體分化形成過程中mMARVELD1基因的表達(dá)變化,實(shí)驗(yàn)采用小鼠胚胎干細(xì)胞ESR1系為實(shí)驗(yàn)材料,并采用去LIF培養(yǎng)基培養(yǎng)ES細(xì)胞向擬胚體(Embry

3、oid Bodies,EBs)的分化形成,并檢測(cè)ES細(xì)胞向擬胚體分化形成過程mMARVELD1蛋白的表達(dá)變化,并進(jìn)一步分析了該基因在生物體發(fā)育早期器官形成過程中可能具有的重要作用。研究發(fā)現(xiàn),mMARVELD1基因在ES細(xì)胞中低表達(dá),并且隨著ES細(xì)胞的分化,該基因表達(dá)量總體上呈增加趨勢(shì),尤其在ES細(xì)胞向擬胚體形成第8d時(shí),該基因的表達(dá)量達(dá)到最高水平,表明該基因可能參與ES細(xì)胞的分化及其及其向擬胚體的形成過程。
　　隨后,為研究mMA

4、RVELD1基因?qū)S細(xì)胞向擬胚體分化形成的過程中的影響,研究又進(jìn)一步運(yùn)用RNA干擾技術(shù)對(duì)該基因進(jìn)行沉默,觀察mMARVELD1基因低表達(dá)的ES細(xì)胞向擬胚體形成過程中表現(xiàn)出的形態(tài)學(xué)差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn),該基因能夠促進(jìn)ES細(xì)胞向擬胚體的分化形成過程。與此同時(shí),研究又進(jìn)一步運(yùn)用分子克隆技術(shù)與方法成功構(gòu)建了mMARVELD1基因的敲除載體,并以該載體為實(shí)驗(yàn)材料對(duì)ESR1細(xì)胞電轉(zhuǎn)條件進(jìn)行摸索,以期獲得mMARVELD1基因缺失型的ES細(xì)胞克隆,為深入