F1F0-ATP(合成)酶在角質(zhì)形成細(xì)胞分化過程中的表達(dá)及其功能研究.pdf

1、目的：
　　 F1F0-ATP（合成）酶是一種廣泛分布于各種組織細(xì)胞內(nèi)的酶復(fù)合體，是線粒體氧化磷酸化體系的重要組成部分，主要在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞膜發(fā)揮合成或水解ATP的功能。本研究著眼于F1F0-ATP(合成)酶在角質(zhì)形成細(xì)胞分化過程中表達(dá)的變化，及其可能發(fā)揮的作用。為進(jìn)一步研究角質(zhì)形成細(xì)胞分化與細(xì)胞內(nèi)外ATP水平及能量代謝的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1、采用免疫組化方法檢測和比較分析了正常皮膚、銀屑病、角化

2、棘皮瘤、皮膚鱗癌皮損中F1F0-ATP（合成）酶β亞基(ATP5B)的表達(dá)模式;
　　 2、在建立體外培養(yǎng)密度依賴的HaCaT細(xì)胞分化模型基礎(chǔ)上，用免疫印跡、免疫熒光和RT-PCR的方法檢測F1F0-ATP（合成）酶β亞基(ATP5B)表達(dá)的變化;
　　 3、應(yīng)用ATP熒光定量檢測方法檢測了F1F0-ATP（合成）酶小分子抑制劑——寡霉素和白皮杉醇，對(duì)于HaCaT細(xì)胞內(nèi)外ATP水平的影響，并用免疫印跡方法檢測了其對(duì)于Ha

3、CaT細(xì)胞分化標(biāo)志(involucrin)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、在正常皮膚、銀屑病皮損和角化棘皮瘤中，ATP5B隨表皮分化而表達(dá)增高;在銀屑病皮損和角化棘皮瘤中ATP5B較正常皮膚表達(dá)下降;鱗癌癌灶中ATP5B較周邊相對(duì)正常皮膚表達(dá)下降;
　　 2、建立了體外培養(yǎng)的密度依賴的HaCaT細(xì)胞分化模型，在mRNA水平和蛋白水平驗(yàn)證了分化指標(biāo)的表達(dá)隨培養(yǎng)時(shí)間延長而增加;
　　 3、在密度依賴的HaC

4、aT分化模型中，ATP5B在mRNA水平上，第6d和第8d可見顯著上調(diào)(p＜0.05)，在蛋白水平上未見明顯改變(p＞0.05);
　　 4、常規(guī)培養(yǎng)狀態(tài)下，寡霉素可降低HaCaT細(xì)胞內(nèi)ATP的水平和involucrin蛋白表達(dá)水平;白皮杉醇主要降低HaCaT細(xì)胞外ATP的水平，對(duì)胞內(nèi)ATP水平和involucrin蛋白表達(dá)水平無明顯抑制作用;
　　 5、在密度依賴的分化模型中，白皮杉醇可顯著降低分化模型后期細(xì)胞內(nèi)ATP