去甲二氫愈創(chuàng)木酸交聯(lián)豬去細(xì)胞脊髓支架及其相關(guān)特性的研究.pdf

1、目的：觀察去甲二氫愈創(chuàng)木酸（Nordihydroguaiaretic Acid，NDGA）交聯(lián)豬去細(xì)胞脊髓支架的結(jié)構(gòu)及性能。
　　方法：取成年豬胸段脊髓，采用2次凍融化學(xué)萃取法對脊髓行去細(xì)胞處理得到脊髓去細(xì)胞支架，再用2.5g/L NDGA溶液進(jìn)行交聯(lián)處理。在體視顯微鏡及掃描電鏡下分別觀察豬去細(xì)胞脊髓支架及NDGA交聯(lián)及NDGA交聯(lián)豬去細(xì)胞脊髓支架的結(jié)構(gòu)。采用Instrong生物力學(xué)測試儀檢測正常豬脊髓（正常組）、豬去細(xì)胞脊髓支架

2、（未交聯(lián)支架組）及NDGA交聯(lián)豬去細(xì)胞脊髓支架（交聯(lián)支架組）的抗拉強(qiáng)度和彈性模量。取第4代SD大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞分別與未交聯(lián)支架及NDGA交聯(lián)支架聯(lián)合培養(yǎng)，采用CCK8法檢測細(xì)胞生長率，評價支架的細(xì)胞毒性。將未交聯(lián)支架和DNGA交聯(lián)支架分別包埋至SD大鼠背部皮下，在1、2、4w后取出檢測其包埋后的降解率。并取包埋4w的組織行HE染色及CD8+免疫熒光染色，評價支架的生物相容性。
　　結(jié)果：正常組脊髓組織為圓柱狀，呈乳白色，橫切面可見

3、灰質(zhì)與白質(zhì)分界明顯；未交聯(lián)支架基本保持原組織外形，呈白色半透明狀，白質(zhì)與灰質(zhì)無明顯分界；交聯(lián)支架質(zhì)地稍變硬，呈棕黃色。掃描電鏡顯示未交聯(lián)支架與交聯(lián)支架內(nèi)的基質(zhì)纖維保存完好，相互交織成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)部孔隙聯(lián)通。未交聯(lián)支架的抗拉強(qiáng)度及彈性模量較正常組顯著下降（P<0.05）；交聯(lián)支架抗拉強(qiáng)度和彈性模量較未交聯(lián)支架顯著增強(qiáng)，兩組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05），但仍低于正常組（P<0.05）。星形膠質(zhì)細(xì)胞在交聯(lián)組及未交聯(lián)組中均生長良好，共培

4、養(yǎng)時間越久，OD值越大，兩組相同時間點OD值比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P﹥0.05）。相同時間點交聯(lián)組相對于未交聯(lián)組在體內(nèi)降解率明顯下降。包埋4周后未交聯(lián)組HE染色可見大量炎癥細(xì)胞及成纖維細(xì)胞浸潤在支架內(nèi)，并且有肉芽組織聚集在未交聯(lián)支架的內(nèi)部孔隙中；交聯(lián)組炎癥細(xì)胞明顯減少，且可見新生血管裝結(jié)構(gòu)。相應(yīng)的CD8+熒光染色見NDGA交聯(lián)支架中T淋巴細(xì)胞較未交聯(lián)支架顯著減少。
　　結(jié)論： NDGA交聯(lián)豬去細(xì)胞脊髓與未交聯(lián)豬去細(xì)胞脊髓支架比較三維結(jié)