短刺加電針法對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型軟骨細(xì)胞肥大的影響.pdf

1、目的：觀察短刺加電針法對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎的療效，探索短刺加電針治療兔膝骨關(guān)節(jié)炎的軟骨細(xì)胞作用機(jī)制。
　　方法：40只新西蘭兔隨機(jī)分為正常組（N組）10只、造模組30只，對(duì)造模組行Hulth-Telhag手術(shù)法復(fù)制膝骨關(guān)節(jié)炎模型，X線評(píng)估造模情況，造模成功后隨機(jī)分為模型組（M組）、短刺組（CN組）和普通針刺組（NTN組）。術(shù)后6周開始治療，M組不予任何處理，CN和NTN組取足三里、內(nèi)外膝眼、梁丘和陰陵泉穴，CN組采用貼骨深刺的短刺加電針

2、法，NTN組采用普通針刺加電針法，留針20min，每天1次，每個(gè)療程5天，共治療4個(gè)療程。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采用HE染色觀察軟骨細(xì)胞的組織學(xué)改變，甲苯胺藍(lán)染色觀察軟骨細(xì)胞形態(tài)，分別在治療前和治療結(jié)束后觀察各組新西蘭兔的行為學(xué)改變；免疫組化檢測(cè)Runx2和ColⅩ蛋白的表達(dá)；Western-Blot法檢測(cè)Runx2、Sox9和ColⅩ蛋白的表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)Sox9 mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：Lequesne MG評(píng)分、染色、Mank

3、in評(píng)分、免疫組化、WB及RT-PCR結(jié)果一致。
　?。?）行為學(xué)評(píng)分：N組Lequesne MG評(píng)分在0～1分，行為學(xué)正常，與N相比，治療前M、CN、和NTN組Lequesne MG評(píng)分顯著增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01），M、CN、NTN組在治療前Lequesne MG評(píng)分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.01），治療結(jié)束后，與M組相比，CN和NTN組評(píng)分顯著降低，其中CN組降低更加明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）;
　

4、　（2）染色觀察及Mankin評(píng)分：N組軟骨表面光滑、軟骨細(xì)胞分布均勻、排列整齊、甲苯胺藍(lán)染色均勻無失染、潮線完整；M組軟骨表層有裂隙、軟骨細(xì)胞層次不清晰、排列無序、有成簇細(xì)胞出現(xiàn)、甲苯胺藍(lán)染色深染、潮線不完整；CN組軟骨表面不規(guī)則、軟骨細(xì)胞數(shù)量較少、排列稍紊亂、輕度失染、潮線較完整；NTN組軟骨表面粗糙、軟骨細(xì)胞排列紊亂、出現(xiàn)成簇細(xì)胞、輕度失染、潮線不完整。CN組和NTN組與M組相比軟骨細(xì)胞分布較均勻，軟骨缺損程度減輕；CN組與NTN

5、組相比細(xì)胞染色更均勻、細(xì)胞排列更整齊、層次清晰。Mankin評(píng)分顯示：N組Mankin評(píng)分0～1分，M組Mankin評(píng)分7～9分，CN組Mankin評(píng)分3～5分，NTN組Mankin評(píng)分4～6分，四組評(píng)分有顯著差異（P＜0.01）。
　?。?）免疫組化和Western-Blot(WB)檢測(cè)：與M組比較，N、CN、NTN組Runx2和ColⅩ蛋白表達(dá)量顯著降低，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；CN組較NTN組顯著降低，兩組比較

6、有差異（P＜0.01），說明短刺加電針法能有效下調(diào)Runx2和ColⅩ蛋白表達(dá)，且效果優(yōu)于普通針刺組。
　?。?）RT-PCR檢測(cè)：與N組比較，M組、CN組和NTN組Sox9 mRNA表達(dá)量明顯降低（P＜0.01）；與M組比較，CN組和NTN組Sox9 mRNA表達(dá)量明顯升高（P＜0.01）；且CN組Sox9 mRNA表達(dá)量明顯高于NTN組（P＜0.01）。
　　結(jié)論：短刺加電針法較普通針刺法更能有效地治療KOA，短刺加電針