調控RAC1-NADPH信號通路對不同分化類型鼻咽癌細胞的放射敏感性研究.pdf

1、目的：通過激活和抑制鼻咽癌CNE-1和CNE-2細胞中的RAC1/NADPH信號通路，探討RAC1/NADPH信號通路與鼻咽癌CNE-1和CNE-2細胞放射敏感性的關系以及化合物GXHSWAQ-4作為鼻咽癌放射增敏劑的潛在可能性。
　　方法：本研究以人鼻咽癌高分化鱗癌CNE-1和低分化鱗癌CNE-2細胞為研究對象，選擇PMA為RAC1激活劑，NSC23766為RAC1抑制劑，化合物GXHSWAQ-4為受試物，照射劑量為2 Gy,對

2、各組細胞進行不同處理后，測定下列各項指標：
　　1、 RAC1-GTPpulldownassay檢測各組細胞中RAC1-GTP蛋白的表達；
　　2、蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測照射前后各組細胞RAC1/NADPH信號通路中RAC1、p47和p67總蛋白以及下游JNK/AP-1信號通路中p38、phospho-p38、AP-1、phospho-AP-1、JNK1/2和phospho-JNK蛋白的表達水平的變化

3、；
　　3、免疫熒光法觀測各組細胞RAC1的分布和定位；
　　4、 NBT法檢測各組細胞中NADPH氧化酶活性的變化；
　　5、流式細胞儀檢測各組細胞中ROS濃度和細胞的凋亡率；
　　6、 MTT法檢測各組細胞的存活分數(shù)；
　　結果：1、PMA作用濃度為100 nmol.L-1，作用時間30 min，對NADPH氧化酶活性的激活效果最好；NSC23766作用濃度為25μmol.L-1，作用時間1 h，對NA

4、DPH氧化酶活性的抑制效果最佳。
　　2、PMA或PMA結合照射處理組，與空白組或單獨照射組相比，CNE-1和CNE-2細胞中的RAC1-GTP蛋白表達增加；RAC1蛋白活化并轉移到細胞膜上；總蛋白p47、p67和RAC1的表達增加；JNK/AP-1信號通路磷酸化phospho-p38、phospho-AP-1和phospho-JNK蛋白的表達增加；細胞中NADPH氧化酶的活性增加；ROS濃度增加；細胞凋亡率增加。NSC23766

5、的作用結果則與PMA相反。上述大部分指標在CNE-1細胞中的變化程度大于CNE-2細胞。
　　3、化合物GXHSWAQ-4聯(lián)合照射處理后，與單獨照射組比較，CNE-1和CNE-2細胞中的RAC1-GTP蛋白表達增加；p67和RAC1總蛋白的表達增加；JNK/AP-1信號通路磷酸化phospho-p38，phospho-AP-1和phospho-JNK蛋白的表達增加；細胞中NADPH氧化酶的活性、ROS濃度以及細胞凋亡率均增加。

6、r>　　結論：1、PMA和NSC23766能有效激活和抑制鼻咽癌CNE-1和CNE-2細胞中RAC1-GTP的活性，從而調控RC1/NADPH信號通路。
　　2、調控RAC1/NADPH信號通路可影響下游JNK/AP-1信號通路的變化，從而改變鼻咽癌CNE-1和CNE-2細胞的輻射敏感性。且對鼻咽癌CNE-1細胞影響大于CNE-2細胞。
　　3、化合物GXHSWAQ-4聯(lián)合照射后能增加鼻咽癌CNE-1和CNE-2細胞的輻射敏