靶向阻斷mTOR信號(hào)通路對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響.pdf

1、背景： 鼻咽癌是我國(guó)南方常見(jiàn)的惡性腫瘤，因?yàn)槠浣馄饰恢玫奶厥饧叭菀桌奂帮B底，發(fā)生咽旁及頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其主要的治療手段為放射治療，雖然放療技術(shù)不斷提高，但患者五年生存率無(wú)明顯改善，探索新的治療方式成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（Mammalian Target of Rapamycin，mTOR）是PTEN/PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路中的一個(gè)關(guān)鍵分子，在調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)增殖中起著關(guān)鍵的作用。眾多研究表明mTOR信

2、號(hào)通路在腫瘤細(xì)胞中異常激活，因此成為抗腫瘤治療中一個(gè)有效的靶點(diǎn)。近年來(lái)mTOR抑制劑用于多種腫瘤的治療顯示出潛在的優(yōu)勢(shì)，其臨床前期實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)已在積極地進(jìn)行中。但mTOR抑制劑在鼻咽癌治療方面罕有報(bào)道。 目的： 本課題旨在觀察一種mTOR特異性抑制劑雷帕霉素（Rapamycin）對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞株生長(zhǎng)、細(xì)胞周期的影響，探討mTOR信號(hào)通路下游因子核糖體40S小亞基S6蛋白激酶（p70S6K）和真核翻譯起始因子4E結(jié)合蛋白

3、1（4EBP1）在Rapamycin抗腫瘤活性中的作用。 方法： 不同濃度（0、5、10、20、40、80、160nmol/L）Rapamycin處理鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1、CNE-2，應(yīng)用CCK-8法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)（24h、48h、72h）細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率；光學(xué)顯微鏡直接觀察藥物處理48h后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期、凋亡率的分析；RT-PCR檢測(cè)藥物處理前后mTOR、p70S6K和p4EBP1的mRNA水平

4、的差異。 結(jié)果： （1）Rapamycin處理48h、72h的CNE-1、CNE-2細(xì)胞株，隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率增高，變化呈濃度依賴(lài)性，與對(duì)照組生長(zhǎng)抑制率相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），24h抑制率與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。藥物處理后48hCNE-1細(xì)胞密度明顯降低，細(xì)胞形態(tài)變小，偽足減少變短。CNE-2細(xì)胞密度明顯降低，細(xì)胞形態(tài)變化不明顯。 （2）CNE-1、CNE-

5、2細(xì)胞在Rapamycin作用下，G1期的細(xì)胞增加，S期的細(xì)胞減少，G1期細(xì)胞比例與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且變化呈濃度依賴(lài)性，但誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用不明顯。 （3）Rapamycin抑制了CNE-2細(xì)胞株mTOR mRNA的表達(dá)，并使p70S6K和p4EBP1的mRNA表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且變化亦呈現(xiàn)濃度依賴(lài)性。 結(jié)論 （1）Rapamycin能抑制鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1、CNE-2

6、生長(zhǎng)及增殖。 （2）流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果提示Rapamycin抑制CNE-1、CNE-2生長(zhǎng)及增殖的機(jī)制可能主要是抑制了細(xì)胞周期進(jìn)展，將細(xì)胞阻滯于G1期，而非誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 （3）Rapamycin能抑制鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2中mTOR mRNA的表達(dá)及其下游底物p70S6K和4EBP1的磷酸化，進(jìn)而抑制翻譯起始，降低蛋白質(zhì)的合成，從而抑制CNE-2細(xì)胞的生長(zhǎng)。 （4）上述結(jié)論為Rapamycin靶向治療鼻咽癌打下良