和厚樸酚對人鼻咽癌細(xì)胞生長及放射敏感性影響的研究.pdf

1、目的:探討和厚樸酚(Honokiol，HK)對人鼻咽癌CNE-1和CNE-2細(xì)胞生長及放射敏感性的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　 方法:選用人鼻咽癌高分化CNE-1和低分化CNE-2細(xì)胞系為研究對象。
　　 (1)四氮唑鹽比色法(MTT)檢測和厚樸酚對人鼻咽癌CNE-1和CNE-2細(xì)胞存活率的影響;
　　 (2)劃痕愈合實(shí)驗(yàn)觀察和厚樸酚對細(xì)胞遷徙能力的影響;
　　 (3)磷脂酰絲氨酸外翻法(AnnexinV和PI

2、雙染法)檢測和厚樸酚對細(xì)胞凋亡及壞死的影響;
　　 (4)克隆形成法檢測和厚樸酚對細(xì)胞的放射增敏作用;
　　 (5)流式細(xì)胞術(shù)檢測和厚樸酚聯(lián)合X射線作用對細(xì)胞周期的影響;
　　 (6)Westernblot法檢測和厚樸酚作用對細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax表達(dá)的影響以及聯(lián)合X射線作用對細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白CyclinBl、Cdc2的表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果
　　 (1)和厚

3、樸酚明顯抑制CNE-1和CNE-2細(xì)胞生長，且存在著明顯劑量和時(shí)間依賴性，IC50(半數(shù)抑制濃度)在CNE-1和CNE-2細(xì)胞分別為2.84和2.68μmol/L(24h),2.50和2.20μmol/L(48h);
　　 (2)和厚樸酚能明顯降低CNE-1和CNE-2細(xì)胞的遷徙能力;
　　 (3)和厚樸酚誘導(dǎo)劑量依賴性的CNE-1細(xì)胞的凋亡和壞死，與對照組細(xì)胞相比2.5μmol/L和厚樸酚處理的CNE-1細(xì)胞的早期凋亡

4、細(xì)胞由1.04±0.08上升到24.53±0.99，晚期凋亡細(xì)胞由0.06±0.03上升到23.05±4.87，壞死細(xì)胞由0.07±0.03上升到7.13±2.01，各組與對照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=-41.17、-8.18和-6.08，P＜0.01);
　　 (4)在無明顯細(xì)胞毒性劑量下，和厚樸酚24h預(yù)處理可以明顯提高CNE-1和CNE-2細(xì)胞對X射線的放射敏感性，在CNE-1細(xì)胞，和厚樸酚+X射線照射組與單純照射組相比，

5、D0值1.09＜1.54、Dq值1.17＜1.59、SF2值0.38＜0.57均變小，SER為1.41。而在CNE-2細(xì)胞更加明顯，SER為1.88;
　　 (5)3GyX射線照射明顯增加兩種細(xì)胞G2/M期細(xì)胞的比例(t=-14.96和-19.26，P＜0.01)，同時(shí)G0/G1期細(xì)胞比例明顯減少(t=13.67和24.59，P＜0.01)。和厚樸酚預(yù)處理則在不同程度上降低了照射誘導(dǎo)的G2/M期阻滯(t=7.65和4.98，P＜

6、0.01)，同時(shí)增加了受照細(xì)胞S期細(xì)胞比例(t=-4.40和-15.03，P＜0.05)。
　　 (6)和厚樸酚明顯增加促凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表達(dá)水平和降低抗調(diào)亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平。4μmol/L和3μmol/L的和厚樸酚分別使CNE-1細(xì)胞和CNE-2細(xì)胞中促調(diào)亡蛋白Bax和凋亡效應(yīng)蛋白Caspase-3的表達(dá)水平出現(xiàn)2.31倍和1.89倍(t=-15.92和-17.15，P＜0.01)及4.43倍和1.

7、85倍(t=-29.39和-13.47，P＜0.01)的增加，同時(shí)抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表達(dá)水平出現(xiàn)2.22和2.74倍(t=26.94和66.14，P＜0.01)的降低。和厚樸酚降低了輻射導(dǎo)致的G2/M期細(xì)胞阻滯，并伴隨CyclinB1蛋白表達(dá)明顯的增加(t=-33.07和-73.49，P＜0.01)，但Cdc2蛋白的表達(dá)未見明顯的變化。
　　 結(jié)論
　　 (1)和厚樸酚對人鼻咽癌CNE-1和CNE-2細(xì)胞的抑制率

8、存在明顯的時(shí)間效應(yīng)和劑量效應(yīng)關(guān)系，相同濃度的和厚樸酚對CNE-1和CNE-2細(xì)胞的抑制率不同，對CNE-2細(xì)胞的抑制更明顯，CNE-2細(xì)胞對和厚樸酚更敏感;
　　 (2)和厚樸酚能增加兩種細(xì)胞的放射敏感性，但CNE-2細(xì)胞的輻射增敏比1.88大于CNE-1細(xì)胞的輻射增敏比1.41，說明和厚樸酚對CNE-2細(xì)胞放射增敏作用更明顯;
　　 (3)X射線照射可以引起兩種細(xì)胞產(chǎn)生明顯的G2/M期阻滯，和厚樸酚可以解除由于照射導(dǎo)致