健脾益肺Ⅱ號(hào)對(duì)COPD穩(wěn)定期療效的再分析及其抗炎作用實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種呼吸系統(tǒng)常見(jiàn)的疾病，具有高發(fā)病率、高致死率和高致殘率特點(diǎn)，給社會(huì)和患者帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。目前COPD個(gè)體化治療逐漸得到共識(shí)，即對(duì)患者進(jìn)行治療前病情綜合評(píng)估，根據(jù)評(píng)估結(jié)果選擇合適的治療方案。本課題組前期研究只表明了健脾益肺Ⅱ號(hào)（JYⅡ號(hào)）的臨床療效，但未能根據(jù)病情綜合評(píng)估方法評(píng)價(jià)其對(duì)不同組別患者的臨床療效的側(cè)重點(diǎn)。同時(shí)，其治療作用基礎(chǔ)尚不明確?；谝陨纤?，本課題研究旨在通過(guò)前期臨床療效的再

2、分析和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，明確JYⅡ號(hào)對(duì)病情評(píng)估后不同組別患者的臨床治療優(yōu)勢(shì)，并從炎癥角度探討其作用基礎(chǔ)，從而更好地指導(dǎo)COPD臨床個(gè)體化治療。
　　方法：
　　(1)臨床研究方面，根據(jù)2011年COPD全球倡議（修訂版）首次提出的病情綜合評(píng)估方法（本研究采用mMRC和氣流受限GOLD分級(jí)法），對(duì)本課題組2008.1-2009.10收集的263例COPD穩(wěn)定期患者進(jìn)行病情綜合評(píng)估，分為A、B、C、D組，觀察JYⅡ號(hào)對(duì)各組患者急性加

3、重次數(shù)、肺功能、BODE指數(shù)、6分鐘步行距離(6MWB)、SGRQ、中醫(yī)證候計(jì)分等指標(biāo)的影響并對(duì)病例進(jìn)行ITT分析。
　　(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究方面，將75只SD大鼠根據(jù)體重按照隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為五組，分別是正常組、模型組、JYⅡ號(hào)高劑量組(20g/kg/d)、JYⅡ號(hào)低劑量組(10g/kg/d)和氨茶堿組(60mg/kg/d)，通過(guò)熏煙（8周）和脂多糖(LPS)滴入氣管法（2次）建立COPD模型大鼠，造模4周后予JYⅡ號(hào)和氨茶堿干預(yù)

4、4周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，測(cè)定各組大鼠肺功能、觀察肺組織病理變化;酶鏈免疫吸附法測(cè)定肺組織和支氣管灌洗液中TNF-α、IL-6和IL-8水平;免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肺組織中TNF-α表達(dá);Western blot法觀察HDAC2蛋白、P38MAPK蛋白、磷酸化P38MAPK蛋白、NF-κ B P65蛋白、IκB-α蛋白、磷酸化IκB-α蛋白在肺組織中的表達(dá)情況;Real time-PCR方法檢測(cè)肺組織中TNF-α mRNA、蛋白酶體20SmRNA表

5、達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　(1)臨床研究方面:
　?、俑鹘M急性加重次數(shù)變化情況:與對(duì)照組相比，D組中治療組患者治療后的急性加重次數(shù)減少（P＜0.01），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?、诟鹘M6分鐘步行距離變化情況:與對(duì)照組相比，B組中治療組患者治療后、隨訪后6MwD增加（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與治療前相比，四組中治療組患者治療后的6MwD均上升（P＜0.05），均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與治療前相比，C組中對(duì)照組患者治療

6、后的6MWD下降（F=6.96，P=-0.03＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與治療后相比，B組中對(duì)照組患者隨訪后的6MWD下降（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?、鄹鹘M中醫(yī)證候計(jì)分變化情況:與對(duì)照組相比，A組中治療組患者隨訪后、C組中治療組患者隨訪后和治療后及D組中治療組患者隨訪后的中醫(yī)證候計(jì)分下降(P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與治療前相比，四組中治療組和對(duì)照組患者治療后的中醫(yī)證候計(jì)分下降（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

7、
　?、芨鹘MSGRQ變化情況:與對(duì)照組相比，D組中治療組患者治療后的SGRQ下降(P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與治療前相比，四組中治療組患者治療后的SGRQ下降(P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與治療前相比，A、B、D組中對(duì)照組患者治療后的SGRQ下降（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與治療后相比，A、B組中對(duì)照組患者隨訪后的SGRQ下降（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究方面:
　?、俅笫篌w

8、重變化情況:與正常組相比，模型組體重減輕（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)前后體重差值減?。≒＜0.05），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，藥物干預(yù)組的體重和實(shí)驗(yàn)前后體重差值無(wú)明顯差異（P＞0.05），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?、诜喂δ苤笜?biāo):與正常組相比，模型組大鼠TLC指標(biāo)升高(P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，藥物干預(yù)組TLC指標(biāo)無(wú)明顯差異(P＞0.05)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與正常組相比，模型組大鼠RI和FEV0.1/FVC無(wú)明顯差異（P＞

9、0.05），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，藥物干預(yù)組RI和FEV0.1/FVC無(wú)明顯差異（P＞0.05），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?、鄯谓M織HE染色:與正常組相比，模型組大鼠支氣管粘膜上皮腫脹、紊亂，杯狀細(xì)胞增多，周圍淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡壁變薄，肺泡腔明顯擴(kuò)大，部分肺泡融合形成肺大泡。藥物干預(yù)組較模型組肺組織病理?yè)p害有所改善。
　?、芊谓M織及肺泡灌洗液中炎癥因子表達(dá):與正常組相比，模型組大鼠肺組織中的TNF-α、IL-6、IL-8含量

10、均升高（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組相比，JYⅡ-H組和氨茶堿組大鼠肺組織中的TNF-α、IL-6、IL-8含量降低（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組相比，JYⅡ-L組肺組織中的TNF-α、IL-6、IL-8含量無(wú)明顯差異(P＞0.05)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與正常組相比，模型組BALF中TNF-α含量升高(P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組相比，JYⅡ-H和氨茶堿可使BALF中的TNF-α含量降低(P＜0.05)，

11、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，JYⅡ-L對(duì)BALF中的TNF-α含量影響作用不顯著(P＞0.05)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?、菝庖呓M化結(jié)果:正常大鼠肺組織內(nèi)大氣道上皮細(xì)胞TNF-α表達(dá)水平較低，而模型組則為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，氣道上皮細(xì)胞出現(xiàn)大量的棕褐色顆粒。JYⅡ號(hào)組和氨茶堿組呈陽(yáng)性表達(dá)，氣道上皮細(xì)胞表現(xiàn)為棕黃色顆粒。與正常組相比，模型組肺組織中TNF-α表達(dá)水平增加(P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組相比，JYⅡ-H和氨茶堿可使肺組織中TNF-α

12、表達(dá)水平降低（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而JYⅡ-L對(duì)肺組織中TNF-α表達(dá)水平影響作用不顯著（P＞0.05），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?、轜estern blot和Real time-PCR結(jié)果示:與正常組相比，模型組大鼠肺組織P38蛋白、p-P38蛋白表達(dá)及兩者比值均升高，NF-κ B P65蛋白表達(dá)增加，IκB-α蛋白表達(dá)減少，p-Iκ B-α蛋白表達(dá)增加，p-IκB/IκB比值增大，HDAC2蛋白表達(dá)降低，P＜0.05，均

13、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，藥物干預(yù)組P38蛋白表達(dá)無(wú)顯著差異（P＞0.05），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，JYⅡ-H組和氨茶堿組p-P38蛋白表達(dá)和p-P38/P38比值均降低，NF-κ B P65蛋白表達(dá)減少，IκB-α蛋白表達(dá)增加，p-IκB-α蛋白表達(dá)減少，p-IκB/IκB比值減小，HDAC2蛋白表達(dá)升高，P＜0.05，存在著顯著差異，與模型組相比，JYⅡ-L組p-P38蛋白、NF-κ B P65蛋白、IκB-α蛋白、p-I

14、κ B-α蛋白、HDAC2蛋白表達(dá)及p-IκB/IκB比值、p-P38/P38比值無(wú)明顯差異(P＞0.05)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　與正常組相比，模型組蛋白酶體20S mRNA和TNF-α mRNA表達(dá)水平升高（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型組相比，JYⅡ-H組蛋白酶體20S mRNA表達(dá)水平降低(P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而JYⅡ-L組和氨茶堿組蛋白酶體20S mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯差異（P＞0.05），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

15、;與模型組相比，JYⅡ-H組和氨茶堿組TNF-α mRNA表達(dá)水平降低（P＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，JYⅡ-L組TNF-α mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯差異(P＞0.05)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　(1)臨床研究方面:JYⅡ號(hào)對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)的COPD患者療效顯著，一方面改善C組患者臨床癥狀，另一方面提高D組患者生活質(zhì)量;對(duì)低風(fēng)險(xiǎn)的COPD患者作用表現(xiàn)為改善A組患者的臨床癥狀，提高B組患者運(yùn)動(dòng)耐力。
　　(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研

16、究方面:①香煙煙熏（8周）及LPS氣管內(nèi)滴入（2次）可誘導(dǎo)大鼠發(fā)生COPD病理改變和炎癥反應(yīng)。炎癥反應(yīng)參與了COPD的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。②P38MAPK信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路和HDAC2蛋白共同介導(dǎo)了COPD炎癥反應(yīng)，合成多種炎性細(xì)胞因子，參與了COPD的發(fā)生發(fā)展過(guò)程;同時(shí)蛋白酶體20S參與了NF-κB信號(hào)通路的激活，HDAC2蛋白表達(dá)減少可能間接促進(jìn)了NF-κB信號(hào)通路介導(dǎo)炎癥因子的轉(zhuǎn)錄。③JYⅡ號(hào)對(duì)COPD炎癥反應(yīng)有一定的抑制作用