舌癌干細胞特性的單細胞克隆實驗篩選研究.pdf

1、目的:
　　1.探討阿霉素(Adriamycin，ADM)對人舌癌細胞系Tca-8113干預后單細胞克隆培養(yǎng)能否形成全克隆、部分克隆和旁克隆，并對全克隆進行成瘤性檢測。
　　2.基于癌干細胞耐藥特性，通過應用單細胞克隆培養(yǎng)法和進行裸鼠成瘤實驗，以期篩選并富集舌癌腫瘤干細胞樣細胞。
　　方怯:
　　第一部分，以Tca-8113為研究對象，分A、B、C三組進行單細胞克隆培養(yǎng)和觀察研究。A組采用有限稀釋法對Tca-81

2、13進行單細胞克隆培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)所形成的三種不同形態(tài)克隆的特性:克隆形成率、各類克隆構(gòu)成比和克隆生長曲線;B組用三種濃度阿霉素(0.01μg/ml ADM，0.05μg/ml ADM和0.10μg/ml ADM)對Tca-8113進行體外干預48h后，再采用有限稀釋法進行單細胞克隆培養(yǎng)，并同樣觀察培養(yǎng)后所形成的不同形態(tài)克隆的特性;C組則對Tca-8113采用有限稀釋法進行單細胞克隆培養(yǎng)2周后，再用三種不同濃度阿霉素(0.01μg/ml

3、ADM，0.05μg/ml ADM和0.10μg/mlADM)對培養(yǎng)出的全克隆細胞干預48h，觀察干預后一段時期內(nèi)的全克隆存活情況以及克隆細胞形態(tài)變化。
　　第二部分，將A、B、C組存活的全克隆進行傳代培養(yǎng)，待細胞傳代擴增至2×106個細胞后進行免疫缺陷裸鼠成瘤實驗，以檢測克隆細胞的致瘤性。
　　結(jié)果:
　　第一部分實驗，A組中經(jīng)單細胞克隆培養(yǎng)的Tca-8113細胞能形成全克隆、部分克隆和旁克隆，其構(gòu)成比分別為（49.

4、02±4.44）％，(26.25±1.89)％和(24.72±4.27)％，其總克隆形成率為(57.28±1.81)％。B組中經(jīng)0.01μg/mlADM，0.05μg/ml ADM和0.10μg/ml ADM體外干預48h后的Tca-8113干預細胞均能形成克隆。其中，0.01μg/ml ADM干預細胞能形成全克隆、部分克隆和旁克隆，所占的構(gòu)成比分別為（52.20±1.92）％、（25.31±2.30）％和（22.49±1.82）％，總

5、克隆形成率為（65.98±3.12）％;而0.05μg/ml ADM干預細胞或0.10μg/ml ADM干預細胞進行單細胞克隆培養(yǎng)只能形成全克隆，部分克隆與旁克隆均未見形成，總克隆形成率分別為為（0.693±0.140）‰和（0.053±0.032）‰。C組中Tca-8113全克隆經(jīng)0.01μg/mlADM，0.05μg/ml ADM和0.10μg/ml ADM干預48h后的干預克隆細胞存活率分別為（91.15±1.63）％，（61.1

6、4±5.35）％和(32.47±1.48)％。
　　第二部分實驗結(jié)果顯示，在A、B、C組中存活全克隆的增殖傳代細胞均能在免疫缺陷裸鼠皮下成瘤，成瘤率為100％，且隨阿霉素濃度增高，成瘤時間縮短。
　　結(jié)論:
　　1.舌癌Tca-8113細胞和阿霉素干預的Tca-8113細胞均具有全克隆形成能力。
　　2.Tca-8113全克隆是腫瘤干細胞克隆的可能性較大，對阿霉素具有較強的抵抗性。
　　3.阿霉素干預Tca