肝癌干細(xì)胞標(biāo)志分子的篩選.pdf

1、原發(fā)性肝癌是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫癌之一，在國(guó)內(nèi)和世界范圍內(nèi)都是最主要的癌癥殺手之一，但肝癌的發(fā)生機(jī)制至今還不很明確。目前腫瘤干細(xì)胞理論已越來(lái)越受到普遍認(rèn)可，腫瘤干細(xì)胞的存在對(duì)認(rèn)識(shí)腫瘤發(fā)生的機(jī)制以及針對(duì)腫瘤的治療都具有重要意義。由于至今尚未鑒定出肝癌干細(xì)胞，因此尋找肝癌干細(xì)胞的標(biāo)志分子十分重要。 本研究首先對(duì)一些已知的可能成為肝癌干細(xì)胞表面標(biāo)志的分子(c-met、c-kit、CD44及CD133)進(jìn)行了篩選。研究表明約10％的小鼠H

2、22肝癌實(shí)體瘤細(xì)胞(CD45-TER119)表達(dá)c-met，分析手術(shù)切除肝癌患者的肝癌細(xì)胞表明c-met表達(dá)介于1.5％-53.2％之間；體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)表明，c-met<'+>較c-met<'->細(xì)胞亞群的成瘤性明顯要高。 在鑒定出高致瘤性c-met<'+>CD45<'->肝癌細(xì)胞亞群的基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步對(duì)c-kit、CD44和CD133進(jìn)行了篩選。分析表明分別有0.2-0.5％、0.1％或0.5％的小鼠H22肝癌腹水細(xì)胞表達(dá)c

3、-kit、CD44或CD133，但體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)表明這些分子都可能不能成為肝癌干細(xì)胞的表面標(biāo)志分子。 對(duì)已知的一些可能成為肝癌干細(xì)胞標(biāo)志的分子進(jìn)行研究是篩選肝癌干細(xì)胞標(biāo)志的策略之一。此外，由于腫瘤干細(xì)胞與正常干細(xì)胞具有相似的特性與表面分子標(biāo)志，因此通過(guò)鑒定出正常肝干細(xì)胞的特異性表達(dá)分子，也將為肝癌干細(xì)胞標(biāo)志分子的鑒定提供重要參考價(jià)值。我們?cè)诤竺娴难芯恐欣玫鞍踪|(zhì)組學(xué)的方法進(jìn)行了這樣的一些初步探索。 首先我們建立了一種快速、

4、高效、簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)的方法來(lái)分離純化肝干/前體細(xì)胞，該方法利用免疫磁珠大量分選純化c-Kit-(CD45/TER119)－肝干/前體細(xì)胞，大量高純度的原代干/前體細(xì)胞的獲得可為肝干/前體細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)二維圖譜的建立提供良好的原材料，并為比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究提供良好的基礎(chǔ)和依據(jù)。 隨后的研究中，我們首次得到了一張?jiān)鷆-Kit<'->(CD45/TER119)肝干/前體細(xì)胞的二維電泳蛋白質(zhì)圖譜。通過(guò)對(duì)原代肝干/前體細(xì)胞和未分選的胎肝細(xì)

5、胞的比較蛋白質(zhì)學(xué)研究，我們發(fā)現(xiàn)共有19個(gè)蛋白點(diǎn)對(duì)應(yīng)12個(gè)蛋白質(zhì)在肝干/前體細(xì)胞中表達(dá)明顯升高；一個(gè)十分有趣的發(fā)現(xiàn)是根據(jù)已有的研究報(bào)道絕大多數(shù)的在肝干/前體細(xì)胞中高表達(dá)蛋白質(zhì)(共11個(gè))在許多種癌細(xì)胞中高表達(dá)，包括6個(gè)在人肝癌中高表達(dá)。這些鑒定的蛋白質(zhì)提示著干細(xì)胞和腫瘤之間的某種可能聯(lián)系，從側(cè)面表明肝癌從肝干/前體細(xì)胞(或肝癌干細(xì)胞)發(fā)生的可能，也將為肝癌干細(xì)胞的鑒定提供依據(jù)。 總之，本研究通過(guò)兩種策略對(duì)肝癌干細(xì)胞的可能分子標(biāo)志(