肝癌干細胞標志分子的篩選.pdf

1、原發(fā)性肝癌是我國最常見的惡性腫癌之一，在國內(nèi)和世界范圍內(nèi)都是最主要的癌癥殺手之一，但肝癌的發(fā)生機制至今還不很明確。目前腫瘤干細胞理論已越來越受到普遍認可，腫瘤干細胞的存在對認識腫瘤發(fā)生的機制以及針對腫瘤的治療都具有重要意義。由于至今尚未鑒定出肝癌干細胞，因此尋找肝癌干細胞的標志分子十分重要。 本研究首先對一些已知的可能成為肝癌干細胞表面標志的分子(c-met、c-kit、CD44及CD133)進行了篩選。研究表明約10％的小鼠H

2、22肝癌實體瘤細胞(CD45-TER119)表達c-met，分析手術(shù)切除肝癌患者的肝癌細胞表明c-met表達介于1.5％-53.2％之間；體內(nèi)成瘤實驗表明，c-met<'+>較c-met<'->細胞亞群的成瘤性明顯要高。 在鑒定出高致瘤性c-met<'+>CD45<'->肝癌細胞亞群的基礎(chǔ)上，本研究進一步對c-kit、CD44和CD133進行了篩選。分析表明分別有0.2-0.5％、0.1％或0.5％的小鼠H22肝癌腹水細胞表達c

3、-kit、CD44或CD133，但體內(nèi)成瘤實驗表明這些分子都可能不能成為肝癌干細胞的表面標志分子。 對已知的一些可能成為肝癌干細胞標志的分子進行研究是篩選肝癌干細胞標志的策略之一。此外，由于腫瘤干細胞與正常干細胞具有相似的特性與表面分子標志，因此通過鑒定出正常肝干細胞的特異性表達分子，也將為肝癌干細胞標志分子的鑒定提供重要參考價值。我們在后面的研究中利用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法進行了這樣的一些初步探索。 首先我們建立了一種快速、

4、高效、簡單、經(jīng)濟的方法來分離純化肝干/前體細胞，該方法利用免疫磁珠大量分選純化c-Kit-(CD45/TER119)－肝干/前體細胞，大量高純度的原代干/前體細胞的獲得可為肝干/前體細胞蛋白質(zhì)組學(xué)二維圖譜的建立提供良好的原材料，并為比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究提供良好的基礎(chǔ)和依據(jù)。 隨后的研究中，我們首次得到了一張原代c-Kit<'->(CD45/TER119)肝干/前體細胞的二維電泳蛋白質(zhì)圖譜。通過對原代肝干/前體細胞和未分選的胎肝細

5、胞的比較蛋白質(zhì)學(xué)研究，我們發(fā)現(xiàn)共有19個蛋白點對應(yīng)12個蛋白質(zhì)在肝干/前體細胞中表達明顯升高；一個十分有趣的發(fā)現(xiàn)是根據(jù)已有的研究報道絕大多數(shù)的在肝干/前體細胞中高表達蛋白質(zhì)(共11個)在許多種癌細胞中高表達，包括6個在人肝癌中高表達。這些鑒定的蛋白質(zhì)提示著干細胞和腫瘤之間的某種可能聯(lián)系，從側(cè)面表明肝癌從肝干/前體細胞(或肝癌干細胞)發(fā)生的可能，也將為肝癌干細胞的鑒定提供依據(jù)。 總之，本研究通過兩種策略對肝癌干細胞的可能分子標志(