喉癌干細(xì)胞耐藥基因的初步篩選.pdf

1、目的：
　　了解喉癌干細(xì)胞與喉癌化療耐受之間的關(guān)系，并利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)篩選出干細(xì)胞與普通喉癌細(xì)胞之間的差異基因，從中找到多藥耐藥相關(guān)基因，初步分析喉癌干細(xì)胞多藥耐藥的機(jī)制。
　　方法：
　　1.用流式細(xì)胞儀檢測Hep-2、TU177細(xì)胞中CD133、CD44的表達(dá)率，并使用RTCA法檢測 Hep-2、TU177細(xì)胞在順鉑、5-fu、紫杉醇三種化療藥物作用下的生長曲線，計(jì)算不同時(shí)間的IC50值，比較兩種細(xì)胞系中CD13

2、3、CD44的表達(dá)率與化療耐受之間的關(guān)系。
　　2.用免疫磁珠分選法從Hep-2、TU177細(xì)胞中分選CD133+CD44+細(xì)胞，使用qPCR法檢測CD133+CD44+細(xì)胞與親本細(xì)胞中MDR1、MRP2基因的表達(dá)，驗(yàn)證干細(xì)胞與化療耐受的關(guān)系。
　　3.將分選出的CD133+CD44+、CD133-CD44-及正常的Hep-2、TU177細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，檢測干細(xì)胞與普通喉癌細(xì)胞之間的差異基因，進(jìn)行耐藥相關(guān)基因篩選，初步分

3、析干細(xì)胞耐藥機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1.Hep-2細(xì)胞中CD133、CD44陽性率大于TU177細(xì)胞。并且，Hep-2細(xì)胞在三種藥物作用下不同時(shí)間的IC50值均高于TU177細(xì)胞，說明同為喉癌細(xì)胞，Hep-2細(xì)胞相對于TU177細(xì)胞耐藥性更強(qiáng)，同時(shí)與CD133、CD44陽性表達(dá)率呈正相關(guān)。
　　2.Hep-2、TU177經(jīng)免疫磁珠分選后CD133+CD44+細(xì)胞比例可高達(dá)80％-90%，這表明MACS富集CD133+C

4、D44+細(xì)胞有效。Hep-2分選后MDR1較親本細(xì)胞升高2.68倍，MRP2較親本細(xì)胞升高1.68倍；TU177分選后MDR1較親本細(xì)胞升高6.72倍，MRP2較親本細(xì)胞升高42.69倍，可以看出干細(xì)胞富集后，多藥耐藥相關(guān)基因表達(dá)增加，說明干細(xì)胞的表達(dá)與喉癌化療耐受呈正相關(guān)。
　　3.通過轉(zhuǎn)錄組測序找出兩個(gè)喉癌細(xì)胞系共有的差異基因12個(gè)，通過對它們進(jìn)行功能及表達(dá)通路分析，發(fā)現(xiàn)FOS、JUN和NR4A1參與耐藥相關(guān)的PI3K/AKT