半夏瀉心湯對潰瘍性結腸炎脾虛型模型大鼠的療效評價及腸道菌群影響.pdf

1、目的：
　　構建脾虛型潰瘍性結腸炎實驗動物模型，并以此模型驗證半夏瀉心湯對潰瘍性結腸炎（Ulcerative Colitis，UC）的療效，同時動態(tài)觀察實驗動物腸道菌群變化，以期探索腸道菌群與UC及半夏瀉心湯療效相關性。
　　方法：
　　1.脾虛型潰瘍性結腸炎動物模型的復制
　　48只SD大鼠隨機分成4組，空白組、模型組、TNBS組（三硝基苯磺酸（TNBS）是一種有機化學試劑，為半抗原物質，單獨灌腸不能引發(fā)結腸潰

2、瘍，在乙醇灼傷結腸黏膜后進入黏膜內與組織蛋白的賴氨酸ε－氨基團結合形成完全抗原，進而引起炎癥反應及一系列免疫反應）、健脾組。模型組單日禁食加4℃水灌胃，雙日充足飲食加豬油灌胃，同時每日上午、下午強迫大鼠游泳，連續(xù)20天，第21天TNBS+50％乙醇灌腸；TNBS組正常飼養(yǎng)20天，第21天TNBS+50%乙醇溶液灌腸；健脾組造模處理同模型組，同時自造模開始每日灌胃四君子湯水煎劑，直至造模結束；空白組每日灌胃純化水，連續(xù)20天，第21天生理

3、鹽水灌腸。造模期間，每日觀察大鼠精神活動狀態(tài)，體重，食量，大便性狀等一般情況；造模結束觀察大鼠腹腔及結腸大體病理改變，并進行結腸組織切片、HE染色觀察，進行病理評分。
　　2.半夏瀉心湯治療脾虛型潰瘍性結腸炎的療效觀察與組織病理學評價
　　72只SD大鼠隨機分為6組，空白組、模型組、陽性組、高劑量組、中劑量組、低劑量組。除空白組外各組按上述方法進行脾虛型潰瘍性結腸炎模型復制，模型復制成功后，陽性組灌胃柳氮磺胺吡啶水溶液，高中

4、低劑量組分別灌胃半夏瀉心湯高中低劑量水煎液，空白組與模型組灌胃等體積純化水，各組灌胃連續(xù)14天。治療期間每日觀察大鼠一般情況，大便性狀，便血情況，進行疾病指數評價；治療結束觀察大鼠結腸大體情況并進行結腸組織大體損傷指數，結腸組織病理切片HE染色觀察及炎癥分級評分。
　　3.16SrDNA測序法動態(tài)檢測半夏瀉心湯對脾虛型潰瘍性結腸炎大鼠腸道菌群影響
　　動物分組，模型復制及治療同上。分別于造模前、造模中、造模后、治療結束4個時

5、間點動態(tài)搜集大鼠糞便，提取糞便總DNA進行16S rDNA V4高變區(qū)進行PCR擴增，根據擴增結果建立文庫并測序同細菌基因庫比對，進行菌群物種豐度和構成分析，觀察各組菌群改變差異情況。
　　結果：
　　造模中，模型組大鼠出現精神萎靡，嗜睡懶動，扎堆蜷縮弓背，飲食體重明顯下降，活動耐力降低，體毛枯槁雜亂，大便時干時稀等符合大鼠脾虛證的表現；健脾組在相同造模處理下運用四君子湯水煎劑灌胃后沒有出現上述情況，與空白組無差異。TNBS

6、+50%乙醇溶液灌腸后，除空白組外各組均出現體重食量下降，粘液膿血便；結腸粘膜紅腫，糜爛，潰瘍形成，病理切片HE染色觀察結腸組織炎細胞浸潤明顯，粘膜缺失，潰瘍形成。
　　半夏瀉心湯組治療中實驗大鼠食量增加明顯與空白組無差異(P≥0.05)，體重在實驗結束前尚未達到空白組大鼠體重，但較模型組增加顯著(P≥0.05)，大鼠反應靈敏，活動度增加，大便性狀恢復正常，未見粘液膿血便，結腸大體觀察粘膜顏色紅活，未見潰瘍，病理切片HE染色鏡下觀

7、察炎細胞浸潤不明顯，與模型組比較差異顯著(P<0.05)。與陽性組比較，一般狀態(tài)情況明顯好轉，體重食量差異有統計學意義（P<0.05）。高劑量組各項指標略優(yōu)于中低劑量組，顯示出一定的劑量依賴性。
　　大鼠糞便腸道菌群16SrDNA測序發(fā)現腸道菌群結構與UC疾病變化過程高度相關，隨著造模的進行，菌群結構逐漸改變：擬桿菌、梭菌、變形菌等優(yōu)勢菌群數量減少；至造模結束腸道粘膜屏障破壞，菌群結構嚴重失常，并出現“藍細菌”的定植，“藍細菌”是

8、引起環(huán)境污染的菌種，一般不存在于動物體內；經治療后腸道菌群結構逐漸恢復，“藍細菌”消失，與造模前動物菌群結構相似。半夏瀉心湯組與陽性藥物柳氮磺胺吡啶組菌群結構變化相似，均與疾病變化過程密切相關。
　　結論：
　　實驗選擇造模方法合理，成功復制出符合潰瘍性結腸炎病變特征且符合中醫(yī)脾虛證型特點的中醫(yī)病證結合模型。半夏瀉心湯治療效果肯定，較柳氮磺胺吡啶能顯著幫助恢復精神和體質狀態(tài)，療效更優(yōu)，治療后生活質量更佳。16S rDNA測序