組蛋白乙酰化酶抑制劑通過阻斷TGF-β1-Smad3通路逆轉(zhuǎn)腹膜間皮細胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化.pdf

1、目的：腹膜纖維化是腹膜超濾過功能衰退和終止腹膜透析的主要原因，而腹膜纖維化是高糖、腹膜炎等因素導(dǎo)致的，而腹膜間皮細胞（HPMCs）的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化（EMT）被認(rèn)為是腹膜纖維化的重要機制。表觀遺傳學(xué)是近年來生物醫(yī)學(xué)研究的熱點，組蛋白修飾是表觀遺傳學(xué)中重要的修飾方式。最新研究所示，組蛋白乙?；揎棻蛔C實與多種組織器官的纖維化過程有關(guān)，包括肝臟、肺和腎臟等。目前組蛋白乙?；揎検欠駞⑴c腹膜纖維化過程尚無文獻報道。因此，我們試圖通過本研究明確

2、組蛋白乙?；揎棇Ω鼓だw維化的影響及其可能的作用機制。
　　方法：以腹膜間皮細胞為研究對象，分別采用高糖和組蛋白乙?；敢种苿〤646干預(yù)，以CCK-8分析試驗檢測腹膜間皮細胞增殖活性。采用免疫印跡法（Western Blot）檢測細胞鈣粘蛋白（E-cad）、a-肌動蛋白(a-SMA)、I型膠原蛋白（Col I）,纖維連接蛋白（FN）、乙?；慕M蛋白H3和H4、TGF-β1和磷酸化-Smad的蛋白質(zhì)表達；采用比色分析試劑盒分析組蛋

3、白乙?；妻D(zhuǎn)酶(HAT)活力；實時熒光定量試驗檢測HAT亞型p300和GCN5 mRNA的表達；用CHIP試驗和定量實時聚合酶鏈反應(yīng)(QRT-PCR)評估各種信號靶基因水平。
　　結(jié)果：在高糖培養(yǎng)下，腹膜間皮細胞表達細胞鈣粘蛋白的顯著減少，a-肌動蛋白、I型膠原蛋白和纖維連接蛋白的表達明顯增加，表明高糖誘導(dǎo)腹膜間皮細胞發(fā)生了EMT，同時，乙?；疕3表達明顯增高，呈濃度依賴性升高，而乙?；疕4表達無明顯變化，組蛋白乙?；妻D(zhuǎn)酶活力明

4、顯升高，HAT亞型p300 mRNA表達明顯升高。采用C646干預(yù)后，腹膜間皮細胞EMT被抑制，其乙酰化H3表達減少，提示H3的乙酰化可能參與腹膜間皮細胞的 EMT過程。在高糖培養(yǎng)下，腹膜間皮細胞TGF-β1和磷酸化的Smad3表達增多，C646干預(yù)高糖培養(yǎng)下的腹膜間皮細胞，其TGF-β1和磷酸化的Smad3表達明顯減少。表明，C646逆轉(zhuǎn)腹膜間皮細胞的EMT過程可能通過抑制TGF-β1和磷酸化的Smad3信號通路發(fā)揮作用。