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文檔簡介
1、目的:腹膜纖維化是腹膜超濾過功能衰退和終止腹膜透析的主要原因,而腹膜纖維化是高糖、腹膜炎等因素導致的,而腹膜間皮細胞(HPMCs)的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化(EMT)被認為是腹膜纖維化的重要機制。表觀遺傳學是近年來生物醫(yī)學研究的熱點,組蛋白修飾是表觀遺傳學中重要的修飾方式。最新研究所示,組蛋白乙?;揎棻蛔C實與多種組織器官的纖維化過程有關,包括肝臟、肺和腎臟等。目前組蛋白乙酰化修飾是否參與腹膜纖維化過程尚無文獻報道。因此,我們試圖通過本研究明確
2、組蛋白乙?;揎棇Ω鼓だw維化的影響及其可能的作用機制。
方法:以腹膜間皮細胞為研究對象,分別采用高糖和組蛋白乙?;敢种苿〤646干預,以CCK-8分析試驗檢測腹膜間皮細胞增殖活性。采用免疫印跡法(Western Blot)檢測細胞鈣粘蛋白(E-cad)、a-肌動蛋白(a-SMA)、I型膠原蛋白(Col I),纖維連接蛋白(FN)、乙酰化的組蛋白H3和H4、TGF-β1和磷酸化-Smad的蛋白質(zhì)表達;采用比色分析試劑盒分析組蛋
3、白乙?;妻D(zhuǎn)酶(HAT)活力;實時熒光定量試驗檢測HAT亞型p300和GCN5 mRNA的表達;用CHIP試驗和定量實時聚合酶鏈反應(QRT-PCR)評估各種信號靶基因水平。
結果:在高糖培養(yǎng)下,腹膜間皮細胞表達細胞鈣粘蛋白的顯著減少,a-肌動蛋白、I型膠原蛋白和纖維連接蛋白的表達明顯增加,表明高糖誘導腹膜間皮細胞發(fā)生了EMT,同時,乙酰化H3表達明顯增高,呈濃度依賴性升高,而乙?;疕4表達無明顯變化,組蛋白乙?;妻D(zhuǎn)酶活力明
4、顯升高,HAT亞型p300 mRNA表達明顯升高。采用C646干預后,腹膜間皮細胞EMT被抑制,其乙酰化H3表達減少,提示H3的乙酰化可能參與腹膜間皮細胞的 EMT過程。在高糖培養(yǎng)下,腹膜間皮細胞TGF-β1和磷酸化的Smad3表達增多,C646干預高糖培養(yǎng)下的腹膜間皮細胞,其TGF-β1和磷酸化的Smad3表達明顯減少。表明,C646逆轉(zhuǎn)腹膜間皮細胞的EMT過程可能通過抑制TGF-β1和磷酸化的Smad3信號通路發(fā)揮作用。
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