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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
研究腫瘤壞死因子受體(TNFR)相關(guān)因子6(TRAF6)與樹突狀細(xì)胞(dendritic cells,DCs)成熟性的關(guān)系。
方法:
建立膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)小鼠模型,從小鼠股骨中提取骨髓細(xì)胞。重組小鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重組小鼠白細(xì)胞介素-4(rmIL-4)誘導(dǎo)CIA小鼠骨髓細(xì)胞定向分化為未成熟樹突狀細(xì)胞(immature dendritic cell,iDCs
2、),將iDCs分為針對(duì)TRAF6的小干擾RNA(TRAF6-siRNA)轉(zhuǎn)染組、陰性siRNA轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組。轉(zhuǎn)染后實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)TRAF6基因表達(dá)。脂多糖刺激siRNA轉(zhuǎn)染后的iDCs成熟,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DCs成熟程度,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)DCs釋放的促炎癥性因子。
結(jié)果:
CIA小鼠造模成功率達(dá)84%。轉(zhuǎn)染TRAF6-siRNA組iDCs TRAF6 mRNA表達(dá)明顯低于陰性siRNA轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染組(
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