2-甲氧基雌二醇對(duì)鼻咽癌CNE-2干細(xì)胞增殖、遷移及放療抵抗性的影響及機(jī)制.pdf

1、背景及目的：腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cell,CSC)理論表明，腫瘤放療抵抗的根源在于其干細(xì)胞的存在，然而其機(jī)制還不夠清晰。2-甲氧基雌二醇（2-Methoxyestradiol,2-ME2）是雌激素在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物。最近研究發(fā)現(xiàn)2-ME2能通過(guò)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子活性（包括NF-κB/HIF-1），介導(dǎo)多種腫瘤的凋亡與化療的抵抗，因而目前正作為一種抗腫瘤藥物被研究。本研究的目的是明確2-ME2對(duì)鼻咽癌 CNE-2干細(xì)胞（nasop

2、haryngeal carcinoma CNE-2 stem cells,NPCSC）增殖、遷移與放療抵抗的影響及其機(jī)制，對(duì)降低鼻咽癌干細(xì)胞的放療抵抗，進(jìn)而提高鼻咽癌的治愈率具有重要意義。
　　方法：1 NPCSC模型建立利用無(wú)血清懸浮系統(tǒng)富集獲得鼻咽癌CNE-2干細(xì)胞，并通過(guò)再分化、軟瓊脂克隆、Transwell小室實(shí)驗(yàn)和FCM法檢測(cè)富集獲得的CNE-2干細(xì)胞分化、自我更新、遷移及CD133+細(xì)胞比例的變化。RT-PCR法檢測(cè)N

3、PCSC中干細(xì)胞表面標(biāo)志物Bmi-1、Twist1和Oct4 mRNA的表達(dá)。克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NPCSC對(duì)放療的抵抗性。22-ME2對(duì)NPCSC增殖、遷移及放療抵抗性的影響及機(jī)制探討采用不同濃度的2-ME2（0、4和8μmol/L）處理CNE-2干細(xì)胞，再聯(lián)合X射線（0/2/4/8GY）照射，CCK-8及 Transwell檢測(cè)干細(xì)胞增殖及遷移能力的變化，克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè) NPCSC放療抵抗性的改變；FCM及蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)不同濃度2-

4、ME2處理后干細(xì)胞 CD133+細(xì)胞比例變化及 HIF-1α、NF-κB p65和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換（ epithelial-mesenchymal transition，EMT）相關(guān)標(biāo)志物蛋白的表達(dá)。3 NF-κB p65對(duì)2-ME2抗癌效應(yīng)的影響及機(jī)制利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)沉默NF-κB p65基因，聯(lián)合X射線照射，探討NF-κB p65對(duì)2-ME2抗癌效應(yīng)的影響。
　　結(jié)果：1該方法獲得的干樣細(xì)胞具有較強(qiáng)的自我更新及分化能力，相對(duì)于

5、親本CNE-2細(xì)胞具有更強(qiáng)的克隆(p<0.01)及遷移(p<0.01)能力、更高的CD133+細(xì)胞比例(p<0.01)及干性基因比例(p<0.05)，說(shuō)明該細(xì)胞具有較強(qiáng)干性。同時(shí)克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示干樣細(xì)胞對(duì)放療具有較強(qiáng)的抵抗性。我們將此細(xì)胞作為 NPCSC用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。22-ME2（0/4/8μmol/L）處理NPCSC后，隨濃度增加，NPCSC增殖活力降低，遷移能力降低，對(duì)放療抵抗性降低，同時(shí)CD133+細(xì)胞比例降低，HIF-1α、NF