海參蟲草復(fù)劑對糖尿病大鼠腎臟保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、糖尿病腎病(Diabetes nephropathy，DN)是常見的糖尿病慢性微血管并發(fā)癥，病人晚期出現(xiàn)嚴(yán)重腎功能衰竭，是導(dǎo)致糖尿病患者死亡的主要原因之一。因此，控制和延緩糖尿病腎病的發(fā)生和發(fā)展過程具有重要的臨床意義。
　　 海參自古以來被視為珍貴的滋補(bǔ)品，其味咸性溫補(bǔ)，具有補(bǔ)腎益精、養(yǎng)血潤燥、滋陰壯陽之功效。海參中含有海參多糖、海參皂苷、膠原多肽、腦苷脂等多種活性物質(zhì)，具有抗氧化、降血脂、降血壓和免疫調(diào)節(jié)等生理活性。蛹蟲草又名

2、北冬蟲夏草，其化學(xué)成分與冬蟲夏草相似，富含蟲草多糖、蟲草素、蟲草酸、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)等活性物質(zhì)，具有降血糖、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫和抗衰老等功能。中醫(yī)認(rèn)為其味甘性溫平，具有補(bǔ)肺益腎、化痰止咳等功能。將二者配藥具有大補(bǔ)元?dú)?、補(bǔ)腎益肺、養(yǎng)血生精之功效。本研究采用一次性腹腔注射STZ的方法建立糖尿病大鼠模型，在長期高血糖環(huán)境下造成腎臟損傷。采用日本刺參(Apostichopus japonicus)

3、和蛹蟲草(Cordycepsmilitar is)配制成的復(fù)劑灌胃STZ誘導(dǎo)的糖尿病模型大鼠，研究其對大鼠腎臟的保護(hù)作用，并對其作用機(jī)理進(jìn)行了較系統(tǒng)和深入的研究。實(shí)驗(yàn)同時設(shè)立了海參和蟲草單劑組作為比較。主要研究結(jié)果如下：
　　 海參蟲草復(fù)劑具有顯著的降血糖和提高腎小球率過功能的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：海參蟲草復(fù)劑能顯著降低糖尿病大鼠空腹血糖和腎肥大指數(shù)(P＜0.05，P＜0.01)，顯著降低血清中尿素氮(Blood urea nit

4、rogen，BUN)、肌酐(Creatinine，Cr)和尿酸(Uric acid，UA)的含量(P＜0.05，P＜0.01)，顯著減少尿蛋白、微量白蛋白(Microalbuminuria，mA1b)及N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-DGlucosaminidase，NAG)的排泄率(P＜0.05，P＜0.01)。且海參蟲草復(fù)劑的效果憂于單劑。
　　 海參蟲草復(fù)劑具有顯著的脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明：海參

5、蟲草復(fù)劑能顯著降低糖尿病大鼠血清中總膽固醇(Total cholesterol，TC)、甘油三酯(Triglyceride，TG)和游離脂肪酸(Free fatty acid，F(xiàn)FA)的含量(P＜0.05，P＜0.01)，提高肝臟中飽和脂肪酸(Saturated fatty acid，SFA)比例、降低單不飽和脂肪酸(Mono-unsaturatedfatty acid，MUFA)比例，并顯著降低肝臟中硬脂酰輔酶A去飽和酶(Stearo

6、yl-CoAdesaturase，SCD)活性。提示海參蟲草復(fù)劑對脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用可能是通過降低SCD活性來抑制脂質(zhì)合成實(shí)現(xiàn)的。
　　 海參蟲草復(fù)劑具有顯著的抗氧化功能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，海參蟲草復(fù)劑能昱著降低糖尿病大鼠腎臟中丙二醛(Malondialdehyde，MDA)、一氧化氮(Nobelium，NO)含量(P＜0.01)，提高腎臟中SOD和過氧化氫酶(Catalase，CAT)活力(P＜0.05，P＜0.01)。提示海參蟲

7、草復(fù)劑可通過提高腎臟抗氧化酶活性，清除體內(nèi)自由基，從而達(dá)到腎臟保護(hù)作用。海參蟲草復(fù)劑效果較海參和蟲草單劑使用時優(yōu)。
　　 采用光學(xué)顯微鏡及透射電鏡觀察，研究了海參蟲草復(fù)劑對糖尿病大鼠腎臟組織顯微和亞顯微結(jié)構(gòu)的影響。顯微觀察結(jié)果表明：海參蟲草復(fù)劑能顯著抑制糖尿病大鼠腎小球和腎小管腫大、系膜區(qū)擴(kuò)大和系膜細(xì)胞增生。亞顯微觀察結(jié)果顯示，海參蟲草復(fù)劑能顯著抑制糖尿病大鼠基底膜節(jié)段性增厚，減輕足突細(xì)胞融合現(xiàn)象，減少溶酶體在系膜區(qū)的聚集。說明

8、海參蟲草復(fù)劑能顯著改善糖尿病大鼠腎臟組織的病理學(xué)改變，且海參蟲草復(fù)劑效果優(yōu)于單劑。
　　 利用RT-PCR、Westem blot和免疫組化等方法研究了海參蟲草復(fù)劑對糖尿病大鼠腎臟保護(hù)的機(jī)制。結(jié)果表明，海參蟲草復(fù)劑能顯著抑制糖尿病大鼠腎臟中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming growth factor beta，TGF-β1)及其Ⅱ型受體(TypeⅡ receptor of TGF-β，TβRⅡ)、結(jié)締組織生長因子(C

9、onnective tissue growthfactor，CTGF)的mRNA表達(dá)，降低腎臟中TGF-β1及Ⅳ膠原蛋白的表達(dá)，提高過氧化物酶體增殖激活受體γ(Peroxisome proliferator activated receptor-γ，PPARγ)的基因表達(dá)。TGF-β1與TβRⅡ結(jié)合后發(fā)揮其生物活性直接造成腎臟損傷，并介導(dǎo)其下游因子CTGF的表達(dá)，促進(jìn)Ⅳ膠原等細(xì)胞外基質(zhì)合成、抑制其降解，導(dǎo)致腎臟肥大。而PPARγ激活可調(diào)

10、節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)代謝，減少脂質(zhì)過氧化物對TGF-β1的刺激。提示海參蟲草復(fù)劑可通過提高體內(nèi)PPARγ活性，改善體內(nèi)脂肪代謝紊亂，并抑制TGF-β1、TβRⅡ和CTGF的表達(dá)，從而減少細(xì)胞外基質(zhì)合成，達(dá)到保護(hù)腎臟的作用。且海參蟲草復(fù)劑的效果優(yōu)于海參和蟲草單劑使用的效果。
　　 本論文首次全面系統(tǒng)地研究了海參蟲草復(fù)劑對糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用，并對其機(jī)制進(jìn)行了深入探討。進(jìn)一步挖掘了海參和蟲草的藥用價值，為海參蟲草復(fù)劑臨床推廣應(yīng)用于預(yù)防和治