晚卵泡期孕酮水平對卵巢中反應者子宮內(nèi)膜容受性的影響.pdf

1、目的：
　　通過回顧性分析控制性超排卵（controlled ovarian hyperstimulation,COH）過程中，卵巢不同反應患者，晚卵泡期高孕酮對IVF-ET妊娠結局的影響，研究卵巢中反應患者晚卵泡期高孕酮狀態(tài)下對子宮內(nèi)膜組織學、形態(tài)學及整合素аvβ3、白血病抑制因子（leukaemia inhibitory factor,LIF）、白介素-1（inerleukin-1,IL-1）表達的影響，采用 RNA-seq技

2、術分析卵巢中反應者高孕酮對子宮內(nèi)膜基因表達譜的變化，并用qRT-PCR技術驗證差異基因，分析差異基因的功能，探索COH過程中，晚卵泡期孕酮水平的提早升高對子宮內(nèi)膜容受性影響的可能機制，以期對臨床工作者針對晚卵泡期孕酮水平升高，做出合理的處理方案及預防措施提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、COH中卵巢不同反應者晚卵泡期高孕酮對IVF-ET妊娠結局的影響
　　回顧性分析2003年1月—2013年12月在鄭州大學第二附屬醫(yī)

3、院生殖醫(yī)學中心行長方案IVF-ET助孕患者臨床資料，共納入本研究3841個周期，按照獲卵數(shù)分為卵巢高反應組：獲卵數(shù)≥20，842例；卵巢中反應組：5<獲卵數(shù)<20，2008例；卵巢低反應組：獲卵數(shù)≤5，991例。將總人群及不同卵巢反應組患者HCG日血清孕酮水平分為以下8組：≤1.00，1.00-1.25，1.25-1.5，1.5-1.75，1.75-2.00，2.00-2.25，2.25-2.5，>2.5ng/ml。計算每個孕酮區(qū)間的臨

4、床妊娠率，以及每個孕酮區(qū)間組與最低孕酮組（P≤1ng/ml）相比臨床妊娠率的OR值和95％可信區(qū)間，尋找出卵巢高、中、低反應組孕酮升高的切點值。以此切點值為界點，比較不同卵巢反應人群中孕酮升高組和未升高組的臨床妊娠率、著床率及各項臨床指標的差異。并采用logistic回歸分析不同卵巢反應人群孕酮水平升高的影響因素。
　　2、COH中晚卵泡期高孕酮對卵巢中反應患者子宮內(nèi)膜組織學、胞飲突發(fā)育、整合素аvβ3、LIF、IL-1的影響

5、r>　　選取2014年4月—2015年12月在鄭州大學第二附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學中心行長方案的IVF-ET助孕患者，所有入選患者均為卵巢中反應患者，在本次取卵周期取消移植，并簽署知情同意書。按照HCG日孕酮水平分組：孕酮升高組：n=18， HCG日孕酮≥2.25ng/ml；孕酮未升高組：n=11，HCG日孕酮<2.25ng/ml。取卵后5天采集子宮內(nèi)膜組織，并分為三部分：一部分用無菌生理鹽水漂洗三遍，放入預先配置的2%戊二醛PBS固定液中；一

6、部分用無菌生理鹽水漂洗后，放入10%中性福爾馬林溶液中；一部分迅速投入液氮中保存?zhèn)溆谩２捎肏E染色觀察比較兩組子宮內(nèi)膜組織學變化，掃描電鏡觀察兩組子宮內(nèi)膜胞飲突變化，免疫組化方法及western blot方法檢測兩組子宮內(nèi)膜整合素аvβ3、LIF、IL-1的表達變化。
　　3、應用RNA-seq技術分析COH中晚卵泡期高孕酮對卵巢中反應者子宮內(nèi)膜容受性相關基因表達譜的變化
　　選取2014年4月—2015年12月在鄭州大學第

7、二附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學中心行長方案的IVF-ET助孕患者，所有入選患者均為卵巢中反應患者，在本次取卵周期取消移植，并簽署知情同意書。根據(jù)HCG日血清孕酮水平進行分組：孕酮升高組：n=6，HCG日孕酮≥2.25ng/ml；孕酮未升高組：n=6，HCG日孕酮<2.25ng/ml。取卵后5天采集子宮內(nèi)膜組織，使用 RNase-free水漂洗后分裝成兩份，迅速投入液氮中保存?zhèn)溆?。采?RNA-seq技術分析兩組子宮內(nèi)膜基因表達譜的變化，篩選出差異表

8、達基因，用qRT-PCR方法驗證部分差異基因，并分析相關基因的功能。
　　結果：
　　1、COH中卵巢不同反應者晚卵泡期高孕酮影響IVF-ET妊娠結局
　　隨著卵巢反應性增加，HCG日血清孕酮切點值升高，卵巢高、中、低反應組切點值分別為2.5ng/ml、2.25 ng/ml、1.5 ng/ml。隨著孕酮水平升高，卵巢不同反應組的臨床妊娠率和胚胎種植率均明顯下降（P<0.05），但受精率、卵裂率及優(yōu)質(zhì)胚胎率無明顯差異（P

9、>0.05）。通過logistic回歸分析，提示不同卵巢反應人群中獲卵數(shù)、促性腺激素（gonadotropin,Gn)用量均與孕酮水平升高成正相關（P<0.05）。
　　2、COH中晚卵泡期高孕酮使卵巢中反應者子宮內(nèi)膜分泌期、胞飲突發(fā)育提前，降低整合素аvβ3、LIF、IL-1的表達
　　高孕酮組分泌中期的子宮內(nèi)膜的比例高于孕酮未升高組（P<0.05）；高孕酮組子宮內(nèi)膜胞飲突出現(xiàn)皺縮，孕酮未升高組胞飲突呈發(fā)育中、發(fā)育成熟狀態(tài)

10、；高孕酮組子宮內(nèi)膜中整合素аvβ3（0.212±0.05 vs0.47±0.032）、LIF（0.137±0.027 vs0.531±0.056）、IL-1（0.264±0.018 vs0.515±0.023）蛋白表達量均低于孕酮未升高組（P<0.05）。
　　3、RNA-seq技術分析晚卵泡期高孕酮影響了卵巢中反應者子宮內(nèi)膜容受性相關基因的表達：
　　高孕酮組和孕酮未升高組共有31個顯著性差異基因，其中上調(diào)基因15個基因，

11、下調(diào)基因16個。采用qRT-PCR驗證部分差異表達基因，其中SLC7A4、DDX5、IFI6、HLA-DRB4、HLA-DRB5、SCGB1D2與 RNA-seq結果一致，它們的變化可能與晚卵泡期孕酮提早升高影響子宮內(nèi)膜容受性有關。
　　結論：
　　1、HCG日孕酮水平的提早升高不影響卵子及胚胎質(zhì)量，可能通過影響子宮內(nèi)膜容受性，從而降低了IVF-ET的臨床妊娠率及著床率；隨著卵巢反應性增加， HCG日孕酮閾值水平升高；Gn用