孕酮對(duì)大腸桿菌感染山羊子宮內(nèi)膜的影響機(jī)制.pdf

1、奶牛子宮內(nèi)膜炎是奶牛產(chǎn)后常發(fā)的生殖疾病，常造成奶牛不孕率增加，產(chǎn)奶量下降，給奶牛業(yè)造成巨大的損失。孕酮作為類固醇類激素，能夠引起子宮腔中細(xì)胞因子的積聚，抑制體外淋巴細(xì)胞的功能和體內(nèi)抗體的形成，對(duì)子宮免疫產(chǎn)生一定的影響。
　　為了探究孕酮對(duì)大腸桿菌感染山羊子宮內(nèi)膜的影響機(jī)制，本試驗(yàn)以成年雜交母山羊?yàn)樵囼?yàn)動(dòng)物，通過(guò)對(duì)試驗(yàn)羊肌肉注射孕酮，觀察山羊子宮感染大腸桿菌后生理指標(biāo)、血液和子宮分泌物的WBC數(shù)目變化、子宮內(nèi)膜組織結(jié)構(gòu)變化、子宮內(nèi)膜

2、組織中TLR4、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表達(dá)水平變化以及子宮內(nèi)膜組織中TGF-β、VEGF和EGFR的mRNA表達(dá)水平變化。試驗(yàn)方法:12只體重30～40kg雜交母山羊隨機(jī)分為4組:對(duì)照組、大腸桿菌組、孕酮組和孕酮+大腸桿菌組。實(shí)驗(yàn)第1天開始，每天上午9點(diǎn)對(duì)孕酮組和孕酮+大腸桿菌組實(shí)施肌內(nèi)注射黃體酮注射液(1mg/kg)，實(shí)驗(yàn)第3天通過(guò)宮腔鏡向大腸桿菌組和孕酮+大腸桿菌組山羊子宮內(nèi)注入大腸桿菌液5mL(109

3、cfu/mL)，同時(shí)向?qū)φ战M和孕酮組山羊子宮內(nèi)注入生理鹽水5mL;動(dòng)物試驗(yàn)連續(xù)進(jìn)行10天;分別在注菌后0h、12h、24h、96h和168h測(cè)定試驗(yàn)山羊的體溫(T)、脈搏(P)和呼吸(R)，同時(shí)頸靜脈無(wú)菌采集外周血檢測(cè)WBC數(shù)目變化;分別在注菌后第24h、96h和168h用滅菌棉拭子采集子宮分泌物涂布于載玻片上，Diff Quick染色后鏡檢WBC數(shù)目變化;于注菌后第1天、第4天、第7天通過(guò)宮腔鏡無(wú)菌采集各組試驗(yàn)羊子宮內(nèi)膜組織，部分組織

4、置于10％中性福爾馬林溶液固定，用于病理組織學(xué)觀察，部分組織用PBS液洗滌后放于無(wú)RNA酶的凍存管中并立即放入液氮保存，用于基因表達(dá)檢測(cè)。結(jié)果如下:
　　(1)在接菌后第12h和第24h，與對(duì)照組相比，大腸桿菌組和孕酮+大腸桿菌組試驗(yàn)羊體溫明顯上升，且差異極顯著(p＜0.01);在接菌后第168h，與大腸桿菌組相比，孕酮+大腸桿菌組試驗(yàn)羊體溫下降，且差異顯著(p＜0.05);在接菌后第12h、24h，與對(duì)照組相比，大腸桿菌組試驗(yàn)羊

5、外周血WBC數(shù)目明顯升高，且差異極顯著(p＜0.01)，與大腸桿菌組相比，孕酮+大腸桿菌組試驗(yàn)羊外周血WBC數(shù)目明顯降低，且差異顯著(p＜0.05);接菌后第1天，與對(duì)照組相比，大腸桿菌組與孕酮+大腸桿菌組試驗(yàn)羊子宮分泌物中WBC數(shù)目明顯增多;與大腸桿菌組相比，孕酮+大腸桿菌組試驗(yàn)羊子宮分泌物中WBC數(shù)目明顯減少。
　　(2)在接菌后第1天，大腸桿菌組山羊子宮組織中可見大量白細(xì)胞浸潤(rùn)，子宮黏膜損傷，毛細(xì)血管充血;孕酮+大腸桿菌組山

6、羊子宮組織切片可見少量白細(xì)胞浸潤(rùn)。在接菌后第4天，大腸桿菌組山羊子宮組織中依然可見大量白細(xì)胞浸潤(rùn)，其他各組子宮組織未見明顯變化。
　　(3)在接菌后第1天，與對(duì)照組相比，大腸桿菌組試驗(yàn)羊子宮內(nèi)膜組織TLR4、IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-8的mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯升高，且差異顯著(p＜0.05);與大腸桿菌組相比，孕酮+大腸桿菌組的試驗(yàn)羊子宮內(nèi)膜組織TLR4、IL-6、IL-8的mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯降低，且差異顯著(p

7、＜0.05)。在接菌后第4天，與大腸桿菌組相比，孕酮+大腸桿菌組試驗(yàn)羊子宮內(nèi)膜組織TLR4、TNF-α的mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯下降，且差異顯著(p＜0.05)。
　　(4)在接菌后第1天，與對(duì)照組相比，大腸桿菌組與孕酮組試驗(yàn)羊子宮內(nèi)膜組織TGF-β mRNA相對(duì)表達(dá)量升高，但差異不顯著(p＞0.05)，大腸桿菌組、孕酮組和孕酮+大腸桿菌組試驗(yàn)羊子宮內(nèi)膜組織VEGF和EGFR的mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯降低，僅大腸桿菌組差異顯著(p＜0

8、.05)。與大腸桿菌組相比，孕酮+大腸桿菌組試驗(yàn)羊子宮內(nèi)膜組織TGF-βmRNA相對(duì)表達(dá)量降低，但差異不顯著(p＞0.05)，孕酮+大腸桿菌組試驗(yàn)羊子宮內(nèi)膜組織VEGF mRNA相對(duì)表達(dá)量升高，但差異不顯著(p＞0.05)。
　　結(jié)論:山羊子宮接注大腸桿菌后，山羊的T、P和R以及外周血與子宮分泌物中WBC數(shù)目增多，山羊子宮發(fā)生急性感染。孕酮能夠調(diào)節(jié)子宮接注大腸桿菌后山羊子宮內(nèi)膜中TLR4、IL-6、TNF-α、 IL-1β和IL-