蒽醌類化合物T20對(duì)擬缺血損傷后rBMECs上P-gp的影響.pdf

1、目的：探討蒽醌類化合物T20對(duì)擬缺血性損傷后大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（Rat Brain Microvascular Endothelial Cells，rBMECs）上P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）的影響及其作用機(jī)制。
　　方法：⑴采用原代培養(yǎng)的方法培養(yǎng)rBMECs和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，用MTT法檢測(cè)化合物T20對(duì)rBMECs增殖的影響；運(yùn)用Transwell建立rBMECs和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)體系，在共培養(yǎng)體系內(nèi)室

2、加入化合物T20，測(cè)定外室、內(nèi)室羅丹明123（Rhodamine123， Rh123）的表觀滲透系數(shù)（Apparent Permeability Coefficient，Papp）以反映rBMECs上P-gp功能的變化；測(cè)定外室熒光素鈉（Fluorescein Sodium Injection，NaF）的Papp以確保rBMECs緊密連結(jié)的完整性；采用Western Blot法測(cè)定T20對(duì)正常培養(yǎng)條件下rBMECs上P-gp表達(dá)的影響。

3、⑵用MTT法檢測(cè)不同濃度的Na2S2O4對(duì)原代培養(yǎng)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞損傷6小時(shí)的存活率，Na2S2O4作用于共培養(yǎng)體系外室的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，測(cè)定外室、內(nèi)室Rh123及外室NaF的Papp值；在共培養(yǎng)體系外室加入Na2S2O4內(nèi)室加入化合物T20，測(cè)定外室、內(nèi)室Rh123及外室NaF的Papp值；采用Western Blot法測(cè)定T20對(duì)擬缺血損傷后rBMECs上P-gp表達(dá)的影響。⑶用MTT法檢測(cè)不同濃度的PD（PD98059，MEK抑制劑）

4、、PDTC（Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate，NF-κB活化抑制劑）和 ZnPP（Zinc protoporphyrin，HO-1抑制劑）對(duì)rBMECs增殖的影響，在共培養(yǎng)體系外室加入阿司匹林（Aspirin，ASA）、內(nèi)室加入化合物T20或PD、PDTC、ZnPP，測(cè)定外室、內(nèi)室Rh123及外室NaF的Papp值；采用Western Blot法測(cè)定神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中TNF-α， rBMECs中p-ER

5、K、p-IκB-α、HO-1和P-gp的變化。
　　結(jié)果：①蒽醌類化合物T20能夠濃度依賴性的下調(diào)rBMECs上P-gp的功能和表達(dá)。②終濃度為3.75mM的Na2S2O4損傷神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞后可上調(diào)rBMECs上P-gp的功能；蒽醌類化合物T20能夠濃度依賴性的下調(diào)擬缺血損傷后rBMECs上P-gp的功能和表達(dá)。③蒽醌類化合物T20通過(guò)抑制神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中TNF-α的表達(dá)，抑制rBMECs上p-ERK、p-IκB-α和HO-1的表達(dá)，