大黃蒽醌類化合物對T淋巴細(xì)胞增殖的作用和機(jī)制的研究.pdf

1、T淋巴細(xì)胞的活化和增殖是機(jī)體重要的免疫反應(yīng)，植物血凝素(PHA)作為有絲分裂原可刺激T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞并進(jìn)行增殖。淋巴細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子濃度的變化在調(diào)控細(xì)胞的活化、增殖以及功能中起重要作用。本文采用MTT法和單細(xì)胞鈣熒光成像技術(shù)，研究了中藥大黃的有效成分蘆薈大黃素、大黃酸和大黃素對PHA引起的大鼠T淋巴細(xì)胞增殖的影響以及與細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度([Ca<'2+>]<,i>)變化的關(guān)系。 通過MTT比色法實(shí)驗(yàn)證明：蘆薈大黃素對PHA引起

2、的大鼠T淋巴細(xì)胞增殖具有抑制作用，1，10，100μM濃度的蘆薈大黃素抑制率分別為30％， 33％和38％； 1，10，100μM時大黃酸的抑制效果分別為22％，23％和25％；大黃素抑制率在1，10，100μM濃度時分別為30％，31％和31％。 鈣熒光成像技術(shù)結(jié)果表明：PHA使淋巴細(xì)胞[Ca<'2+>]<,i>由基礎(chǔ)值迅速升高，并持續(xù)維持高[Ca<'2+>]<,i>水平，形成平臺。PHA誘發(fā)的細(xì)胞[Ca<'2+>]<,i>升

3、高包括胞內(nèi)Ca<'2+>釋放和胞外Ca<'2+>內(nèi)流兩個過程，而持續(xù)性高[Ca<'2+>]<,i>平臺的維持主要與Ca<'2+>內(nèi)流有關(guān)。 蘆薈大黃素對PHA引起的淋巴細(xì)胞[Ca<'2+>]<,i>升高有明顯的抑制作用，1μM濃度蘆薈大黃素存在條件下，PHA引起的[Ca<'2+>]<,i>升高的峰值被抑制，并且[Ca<'2+>]<,i>快速升高達(dá)到峰值后迅速下降，恢復(fù)到基礎(chǔ)值水平，不能形成持續(xù)性高[Ca<'2+>]<,i>平臺，

4、10μM濃度蘆薈大黃素作用后的T細(xì)胞，PHA刺激后，鈣信號被完全抑制，表明蘆薈大黃素對胞外Ca<'2+>內(nèi)流有強(qiáng)抑制作用。 1，10μM濃度的大黃酸作用后的T細(xì)胞，受PHA刺激，在胞外無鈣條件下，鈣信號被完全抑制，說明兩種濃度大黃酸對T細(xì)胞胞內(nèi)鈣釋放均有很強(qiáng)的抑制作用；在胞外有鈣條件下，[Ca<'2+>]<,i>的快速升高均被抑制，[Ca<'2+>]<,i>的升高呈現(xiàn)緩慢坡度上升的趨勢。 濃度為1，10μM大黃素作用后的

5、T淋巴細(xì)胞，受PHA刺激后，在胞外無鈣的條件下，鈣信號被完全抑制，說明大黃素對PHA引起的T細(xì)胞胞內(nèi)鈣釋放具有完全的抑制作用；在胞外有鈣的條件下，T細(xì)胞[Ca<'2+>]<,i>的迅速升高被抑制，只表現(xiàn)為緩慢的上升。 結(jié)論：蘆薈大黃素、大黃酸大黃素和對PHA引起的T淋巴細(xì)胞增殖有抑制作用，且蘆薈大黃素的抑制作用強(qiáng)于大黃素和大黃酸；三種藥物對PHA引起的T細(xì)胞內(nèi)Ca<'2+>濃度升高有抑制作用，但抑制[Ca<'2+>]<,i>升高