新生獼猴溶血性高膽紅素血癥模型建立的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)靜脈注射兩種不同濃度的鹽酸苯肼（phenylhydrazine hydrochloride）溶液致新生獼猴溶血，建立與新生兒溶血相似的獼猴高膽紅素血癥（hyperbilirubinemia）動(dòng)物模型。在模型建立的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究不同程度的溶血對(duì)新生獼猴神經(jīng)系統(tǒng)和生長(zhǎng)發(fā)育的影響,為開(kāi)展高膽紅素血癥致膽紅素腦病（Bilirubin encephalopathy）/核黃疸（kernicterus）、腦性癱瘓等相關(guān)研究提

2、供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)模型。
　　材料與方法：
　　選取24只（12雄12雌）3日齡新生獼猴,雌雄獼猴分別隨機(jī)分為3組,然后隨機(jī)將雌雄組獼猴合并成3組,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組1(4雄4雌)、實(shí)驗(yàn)組2(4雄4雌)和對(duì)照組(4雄4雌)。實(shí)驗(yàn)組1靜脈注射濃度為25mg/kg的鹽酸苯肼溶液,實(shí)驗(yàn)組2靜脈注射濃度為50mg/kg的鹽酸苯肼溶液,對(duì)照組靜脈注射生理鹽水,建立溶血致高膽紅素血癥動(dòng)物模型。3組分別于靜脈注射24h、48h后測(cè)定血膽紅素濃度及血紅

3、蛋白濃度。全天使用監(jiān)控設(shè)備記錄獼猴生長(zhǎng)發(fā)育情況,定期對(duì)獼猴生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)行評(píng)估。對(duì)1例第7d死亡的重癥高膽紅素血癥實(shí)驗(yàn)獼猴腦組織HE染色進(jìn)行病理學(xué)研究。
　　結(jié)果：
　　1.臨床表現(xiàn):實(shí)驗(yàn)組獼猴當(dāng)天都出現(xiàn)不同程度的膚色灰暗、黏膜黃染、呼吸急促、活動(dòng)減少、攝食減少、嗜睡及血紅蛋白尿等溶血性疾病的臨床表現(xiàn),溶血程度及臨床表現(xiàn)與鹽酸苯肼濃度呈正相關(guān)。
　　2.膽紅素及血紅蛋白水平：血清直接膽紅素(conjugated bilir

4、ubin,CB)、間接膽紅素(unconjugated bilirubin,UCB)和總膽紅素(total bilirubin，TBIL)水平與鹽酸苯肼注射濃度呈正相關(guān)。實(shí)驗(yàn)組1間接膽紅素濃度為88.337±18.1876umol/L,直接膽紅素濃度為34.838±11.9459umol/L,總膽紅素濃度為124.425±29.4111umol/L:實(shí)驗(yàn)組2間接膽紅素濃度為165.85±44.932umol/L,直接膽紅素濃度為87.1

5、56±21.2199umol/L,總膽紅素濃度為252.756±63.4255umol/L。對(duì)照組間接膽紅素濃度為7.931±2.3056umol/L,直接膽紅素濃度為12.506±3.5301umol/L,總膽紅素濃度為20.619±5.7154umol/L。與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2血清膽紅素濃度均有升高(P<0.05),實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2中膽紅素升高均以間接膽紅素升高為主,實(shí)驗(yàn)組2升高數(shù)值較實(shí)驗(yàn)組1升高數(shù)值更明顯(P<0.0

6、5)。血清血紅蛋白(hemoglobin，HGB)濃度與鹽酸苯肼注射濃度呈負(fù)相關(guān)。實(shí)驗(yàn)組1血紅蛋白濃度為87.1±11.7309g/L,實(shí)驗(yàn)組2血紅蛋白濃度為47.181±10.0819g/L,對(duì)照組血紅蛋白濃度為136.85±13.4798g/L。與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2血清血紅蛋白水平均有降低(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組2血清血紅蛋白降低數(shù)值較實(shí)驗(yàn)組1血清血紅蛋白降低數(shù)值更明顯(P<0.05)。
　　3.發(fā)育情況：實(shí)驗(yàn)組1

7、和實(shí)驗(yàn)組2中獼猴均出現(xiàn)不同程度的發(fā)育里程碑落后,包括原始反射消失延遲、運(yùn)動(dòng)發(fā)育里程碑延遲、肌張力障礙、活動(dòng)障礙以及進(jìn)食障礙。實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2的原始反射、肌張力、行為狀態(tài)、坐均與對(duì)照組相比,差異具有顯著性(P<0.05);實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2相比,原始反射及肌張力兩者差異沒(méi)有顯著性(P>0.05),而行為狀態(tài)和坐兩者差異具有顯著性(P<0.05);實(shí)驗(yàn)組2中站、抓、高爬與對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1相比差異具有顯著性(P<0.05),而實(shí)驗(yàn)組1站、抓

8、、高爬與對(duì)照組相比,差異不具有顯著性(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組1與對(duì)照組生長(zhǎng)發(fā)育差別于10d后逐漸縮小,發(fā)育逐漸正常；實(shí)驗(yàn)組2與對(duì)照組生長(zhǎng)發(fā)育差別與4月齡后逐漸縮小,發(fā)育逐漸正常。
　　4.腦組織病理：腦組織病理切片中出現(xiàn)大量壞死腦細(xì)胞,腦細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂,部分細(xì)胞腫脹破裂乃至融合,出現(xiàn)核固縮、核碎裂、核溶解,部分細(xì)胞呈嗜酸性改變。腦組織基底節(jié)部可見(jiàn)膽紅素沉積,蒼白球部位最明顯。
　　結(jié)論：
　　兩種濃度的鹽酸苯肼溶液均可引