遺傳性非溶血性結(jié)合型膽紅素血癥UGT1A1變異譜研究.pdf

1、遺傳性非溶血性非結(jié)合型膽紅素血癥，又稱先天性非溶血性黃疸。按照膽紅素的升高程度可分為Gilbert綜合征(Gilbert syndrome，GS)、Crigler-Najjar綜合征Ⅱ型(Crigler-Najjar syndrome typeⅡ，CNS-Ⅱ)和Ⅰ型(CNS-Ⅰ)。GS發(fā)病率超過6％，表現(xiàn)為輕度膽紅素血癥。CNS-Ⅱ表現(xiàn)為中重度膽紅素血癥，但其膽紅素水平可在苯巴比妥治療后恢復(fù)正常或下降;CNS-Ⅰ表現(xiàn)為極重度膽紅素血癥，

2、且對苯巴比妥治療無效，CNS-Ⅰ患兒往往在出生后數(shù)天到數(shù)周內(nèi)死于膽紅素性腦病。
　　脂溶性的非結(jié)合型膽紅素經(jīng)過葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶(UDP-glucuronyltrans ferase，UGTs)催化，與葡糖醛酸的葡糖醛酸基結(jié)合，生成水溶性的結(jié)合型膽紅素，排出體外。UDP-葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶1A1基因(UDP-glucuronyltransferase1A1 gene，UGT1A1)編碼的UGT1A1酶是催化膽紅素葡糖醛酸化的唯一酶。亞

3、洲人GS患者的發(fā)生與該基因的c.-40_-39insTA變異、c.211G＞A(p.G71R)變異、c.1091C＞T(p.P364L)變異相關(guān)，但這些變異的不同等位的連鎖關(guān)系未知，且缺乏系統(tǒng)的家系研究。與CNS-Ⅱ相關(guān)的UGT1A1變異類型已多達(dá)45種，但這些數(shù)據(jù)大多數(shù)都來自西方人種;既往亞洲人群研究的CNS-Ⅱ患者的膽紅素水平多超過200μmol/L，在實(shí)際的臨床工作中，更多的CNS-Ⅱ患者的膽紅素水平在102.6μmol/L到20

4、0μmol/L之間。除此而外，大多數(shù)對遺傳性非溶血性非結(jié)合型膽紅素血癥UGT1A1變異譜的研究并未包括UGT1A1基因的所有的外顯子及功能元件，且存在樣本量太小等問題。
　　本研究對46例無血緣關(guān)系的GS患者、8個(gè)GS家系、11個(gè)CNS-Ⅱ家系、80例健康對照的UGT1A1基因的編碼區(qū)及所有功能元件進(jìn)行了測序，并對所鑒定的變異進(jìn)行了連鎖不平衡分析、單體型、雙體型分析。
　　主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1)共檢測到10個(gè)變異

5、類型:c.-3345delC、c.-3279T＞G、c.-1352C＞A、c.-40_-39insT、c.211G＞A(p.G71R)、 c.686C＞A(p.P229Q)、 c.715C＞T(p.Q239X)、 c.1091C＞T(p.P364L)、c.1253delT(p.M418fsX423)、 c.1456T＞G(P.Y486D)。
　　2)所有的變異均符合Hardy-Weinberg平衡。
　　3)所有的變異之間均

6、存在不同程度的LD，都位于一個(gè)單體型塊內(nèi)，其中c.-3279T＞G變異和c.-1352C＞A變異的配對D'值及r2值均等于1，該兩個(gè)SNP呈完全LD。
　　4)對上述SNP進(jìn)行單體型構(gòu)建得到12個(gè)單體型（均只列出變異等位）:H1(-3345delC/c.-1352A)、H2(c.-3279G)、H3(c.-1352A)、H4(c.-3279G/c.-40_-39insTA)、H5(c.-3279G/c.-40_-39insTA/c

7、.686A)、 H6(c.-1352A/c.211A)、 H7(c.-3279G/c.1091T)、H8(c.-1352A/c.1456G)、H9(c.-1352A/c.211A/c.1456G)、H10(c.3279G/c.-40_-39insTA/c.715T)、H11(c.1352A/c.1253delT)、H12(c.-3279G/c.-40_-39insTA/c.1091T)。H2和H3在對照組中的頻率均高于GS組(0.282

8、和0.098，P=3.160E-4;0.381和0.087，P=4.557E-7)和CNS-Ⅱ組(0.000和0.294，P=0.001;0.381和0.091，P=0.014)。H4和H6在GS組中的頻率均高于對照組(0.359和0.131，P=2.271E-5;0.315和0.169，P=0.007)。H7和H8在CNS-Ⅱ組中的頻率均高于對照組(0.091和0.006，P=0.039;0.091和0.000，P=0.014)。 H

9、9、H10、H11和H12只存在于CNS-Ⅱ組中。
　　5)在病例組及對照組中，一共存在27種單體基因型（雙體型）:雙體型H2/H2只存在于對照組中;雙體型H2/H3和H3/H3的頻率高于GS組(0.325和0.065，P=0.001;0.163和0.022，P=0.015)，CNS-Ⅱ組則不存在這兩種雙體型。雙體型H4/H4、H4/H6和H6/H7在GS組中占有明顯優(yōu)勢，其頻率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對照組(0.152和0.013，P=0.00

10、7;0.239和0.013，P=1.147E-4;0.273和0.000，P=1.184E-4);雙體型H6/H6的頻率在GS組中也高于對照組(0.130和0.025，P=0.05)。雙體型H9/H8、H9/H9、H10/H7、H11/H8、H12/4、H1/H6只存在于CNS-Ⅱ組中。
　　6)8個(gè)GS家系中的6個(gè)完整的核心家系的先癥者雙親的發(fā)病率為25％(3/12)。
　　7)11個(gè)CNS-Ⅱ家系中除先癥者外，未發(fā)現(xiàn)CN

11、S-Ⅱ患者;先癥者C3的母親、C7的姐姐和C10的母親均表現(xiàn)為GS。
　　8)除1例(C1)膽紅素水平為286.4μmol/L的CNS-Ⅱ患者的UGT1A1基因型為與既往研究結(jié)果的高于200μmol/L的CNS-Ⅱ患者(n=9)一樣的純合c.1456T＞G(p.Y486D)并純合c.211G＞A(p.G71R)變異外，其它9例低于200μmol/L的CNS-Ⅱ患者的基因型都不是純合c.1456T＞G(p.Y486D)并純合c.21

12、1G＞A(p.G71R)變異。
　　結(jié)論:
　　1) c.-3279T＞G變異與c.-1352C＞A變異之間呈完全LD關(guān)系，對UGT1A1基因的轉(zhuǎn)錄活性并無影響，也與GS的發(fā)生無關(guān)。
　　2) GS是主要由c.-40_-39insTA和c.211G＞A(p.G71R)所致的隱性遺傳性疾病，少部分病例可能存在其它的基因缺陷。
　　3)大部分CNS-Ⅱ患者的致病變異主要為位于共用外顯子或可導(dǎo)致酶截短的嚴(yán)重變異，而GS

13、的常見致病變異c.-40_-39insTA、c.211G＞A(p.G71R)對CNS-Ⅱ的發(fā)生發(fā)揮協(xié)同作用。少部分CNS-Ⅱ?yàn)閁GT1A1基因和其它未知基因同時(shí)變異所致。
　　4)膽紅素水平低于或高于200μmol/L的CNS-Ⅱ患者的UGT1A1變異譜存在差異，高于200μmol/L的CNS-Ⅱ患者多為純合c.1456T＞G(p.Y486D)并純合c.211G＞A(p.G71R)變異所致，低于200μmol/L的CNS-Ⅱ患者的