磁性pH敏感的復(fù)合載體Dendrosomes的構(gòu)建與腫瘤靶向研究.pdf

1、癌癥是最常見(jiàn)的惡性疾病之一，由于現(xiàn)代人飲食結(jié)構(gòu)、生活方式的改變、嚴(yán)重的環(huán)境污染以及年齡結(jié)構(gòu)老齡化等原因，腫瘤的發(fā)生率呈現(xiàn)出逐漸上升的趨勢(shì)。臨床上，化學(xué)治療是最常見(jiàn)的一種癌癥的治療策略。然而，傳統(tǒng)的化療往往使藥物暴露于腫瘤外的健康組織，導(dǎo)致嚴(yán)重的藥物副作用出現(xiàn)。目前，腫瘤的化療策略更關(guān)注在藥物遞送系統(tǒng)的安全性和有效性上。
　　在本研究中，為了治療效果最大化以及毒副作用最小化的目的，我們?cè)O(shè)計(jì)了一種同時(shí)具備主動(dòng)靶向、被動(dòng)靶向、pH敏感且

2、具備磁響應(yīng)的多功能復(fù)合載體dendrosomes。磁性pH敏感的復(fù)合載體dendrosomes(Mag-pH-DS)是將納米磁性顆粒和葉酸修飾的樹(shù)枝狀聚合物包載進(jìn)長(zhǎng)循環(huán)的pH敏感脂質(zhì)體。復(fù)合載體的腫瘤靶向功能主要通過(guò)pH敏感、磁響應(yīng)以及葉酸的主動(dòng)靶向作用實(shí)現(xiàn)，我們進(jìn)行了一系列的體內(nèi)外研究用于確證這些功能的作用。本文研究具體章節(jié)如下：
　　1復(fù)合載體Mag-pH-DS的制備和表征
　　油酸包覆的 Fe3O4磁性納米顆粒是在堿性

3、條件下用化學(xué)共沉淀法制備的。Fe3O4磁性納米顆粒表面的堿性基團(tuán)與油酸的羧基相互作用，使油酸包裹在磁性顆粒的外層。油酸包覆的 Fe3O4磁性納米顆粒分別使用粉末 X射線衍射、傅立葉變換紅外光譜、透射電鏡和磁滯曲線來(lái)表征其形態(tài)、大小、表面結(jié)構(gòu)、磁性能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明我們成功合成了油酸包覆的Fe3O4磁性納米顆粒，其粒徑小且均勻（約15 nm），單分散性良好，并具有良好的磁性能。
　　我們成功合成了 G4-RHO-FA，用異硫氰基羅丹明

4、（RHO）和葉酸（FA）基團(tuán)共價(jià)修飾的第4代聚酰胺-胺類(lèi)樹(shù)枝狀聚合物（PAMAM G4，G4）后，用氫核磁共振譜進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證，并計(jì)算FA、RHO和PAMAM G4的摩爾比例為4.1:3.7:1。
　　逆向蒸發(fā)法用于將磁性納米顆粒和主動(dòng)靶向的樹(shù)枝狀聚合物包載進(jìn)脂質(zhì)體中。含羧基的二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)和膽固醇琥珀酸單酯(CHEMS)做為pH敏感脂質(zhì)體外殼的組成材料。制備完成的Mag-pH-DS對(duì)G4-RHO-FA具較高的載藥

5、率(70.5％)，經(jīng)動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定顆粒直徑約為200 nm。而pH敏感脂質(zhì)體的平均zeta電位在包載帶正電的樹(shù)枝狀聚合物后從-20.2mV變?yōu)?5.7 mV。透射電鏡和磁聚集效應(yīng)也在此測(cè)定用來(lái)表征Mag-pH-DS的形態(tài)和磁功能，結(jié)果可以看出顆粒大小均一，磁聚集效應(yīng)良好。
　　2復(fù)合載體Mag-pH-DS的體外評(píng)價(jià)
　　復(fù)合載體Mag-pH-DS在pH7.4時(shí)保持穩(wěn)定，在弱酸性條件下釋放內(nèi)部的G4-RHO-FA。 G4-RH

6、O-FA在pH7.4中12小時(shí)釋放不到50%，而在弱酸性條件下8小時(shí)之內(nèi)釋放超過(guò)80%。
　　MTT法用于測(cè)定修飾的樹(shù)枝狀聚合物和復(fù)合載體對(duì)HeLa細(xì)胞的細(xì)胞毒性。在pH6.5時(shí)，由于 G4-RHO-FA從復(fù)合載體 Mag-pH-DS中迅速釋放，與游離的G4-RHO-FA的細(xì)胞毒性相似。在pH7.4的條件下，無(wú)論高濃度還是低濃度，復(fù)合載體Mag-pH-DS顯著降低了游離的G4-RHO-FA對(duì)HeLa細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
　　在細(xì)

7、胞攝取實(shí)驗(yàn)中，葉酸修飾的樹(shù)枝狀聚合物表現(xiàn)出了明顯的主動(dòng)靶向特性。在弱酸性條件下，復(fù)合載體 Mag-pH-DS對(duì)葉酸受體高表達(dá)的 HeLa細(xì)胞的(FR+)表現(xiàn)出較好的細(xì)胞攝取，這也是因?yàn)閮?nèi)部的G4-RHO-FA從復(fù)合載體Mag-pH-DS中釋放出來(lái)后進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞攝取的緣故。
　　我們培養(yǎng)了多細(xì)胞腫瘤球體用于藥物載體的體外滲透性研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明弱酸性環(huán)境以及外磁場(chǎng)的應(yīng)用均能明顯促進(jìn)復(fù)合載體Mag-pH-DS對(duì)腫瘤球體的滲透能力。

8、r>　　3復(fù)合載體Mag-pH-DS的體內(nèi)腫瘤靶向研究
　　活體成像技術(shù)經(jīng)常用于研究藥物遞送系統(tǒng)的靶向性能，避免體內(nèi)體外出現(xiàn)結(jié)果不一致。由于可能在循環(huán)過(guò)程中被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（RES）清除，或者弱細(xì)胞攝取，較差的滲透能力等原因，有些藥物載體在體外表現(xiàn)出良好的靶向性能，但是在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中腫瘤部位積聚變得很差。小動(dòng)物活體成像結(jié)果表明復(fù)合載體Mag-pH-DS能夠有更高的腫瘤部位峰值強(qiáng)度以及更長(zhǎng)的體內(nèi)滯留時(shí)間。
　　復(fù)合載體 Mag-p