MDA-7基因的腺病毒載體構(gòu)建及其腫瘤靶向治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:構(gòu)建端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動子調(diào)控目的基因MDA-7表達(dá)的復(fù)制缺陷型腺病毒，初探MDA-7蛋白對腫瘤細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。 方法:通過基因操作技術(shù)將啟動子(hTERTp)+目的基因(MDA-7)插入到腺病毒穿梭載體中，構(gòu)建復(fù)制缺陷型腺病毒AdTP-mda7；同時構(gòu)建對照病毒AdTP-EGFP。在HEK293細(xì)胞中擴(kuò)增，氯化銫密度梯度離心純化病毒，TCID50法測定病毒滴度，應(yīng)用Western blot檢測經(jīng)腺病毒傳遞的MDA-7在腫瘤

2、細(xì)胞株中表達(dá)；通過結(jié)晶紫染色實(shí)驗(yàn)檢測兩種病毒對腫瘤細(xì)胞的殺傷效應(yīng)差異，拍照。 結(jié)果:成功構(gòu)建攜帶目的基因的腺病毒穿梭質(zhì)粒pSuTP-mda7，PCR鑒定正確；成功制備腺病毒顆粒AdTP-mda7和Ad-EGFP并測得AdTP-mda7滴度為2.69×109pfu/ml、AdTP-EGFP滴度為1.8×108pfu/ml。Western blot分析，MDA-7選擇性在多種腫瘤細(xì)胞株中表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡，如肺腺癌細(xì)胞株A549