不同鼠類宿主對伯氏瘧原蟲易感性的研究.pdf

1、目的：建立不同鼠類宿主易感性的實驗動物模型，觀察不同鼠類宿主易感性的差異，探討造成鼠類宿主易感性差異的機制。
　　方法：(1)昆明小鼠、BALB/c小鼠、SD大鼠分為正常對照組和感染第1、3、5、7、9天組，感染組分別腹腔注射1×106個P.b（SD大鼠注射1×107個P.b），每組10只。(2)記錄不同鼠類宿主的原蟲血率、生存率以及脾臟濕重。(3)流式細胞術(shù)檢測正常對照組和感染組外周血CD4+、CD8+、NK、NKT細胞比例變化

2、。(4) ELISA法檢測正常對照組和感染組外周血ARG、IFN-γ、IL-4含量的變化。(5)使用NO、NOS合酶檢測試劑盒檢測正常對照組和感染組外周血NO、NOS合酶含量的變化。(6)實時熒光定量 PCR法檢測正常對照組和感染組外周血 TLR4、TLR9相對表達的變化。
　　結(jié)果：
　　1.昆明小鼠組和BALB/c小鼠組在感染P.b后原蟲血率逐漸升高，最后全部死亡，而SD大鼠組在感染P.b第5天達到高峰，隨后原蟲血癥逐漸

3、消失。
　　3種鼠類宿主分別與其正常對照組比較，昆明小鼠感染第1、3、5、7、9天組脾臟重量顯著大于正常對照組（P<0.01）；BALB/c小鼠感染第1天組無統(tǒng)計學差異，感染第3、5、7、9天組脾臟重量顯著大于正常對照組（P<0.01）；SD大鼠感染第1天組無統(tǒng)計學差異，感染第3、5、7、9天組脾臟重量大于正常對照組（P<0.05）。
　　2.昆明小鼠外周血 CD4+、CD8+T淋巴細胞比例與正常對照組比較，感染P.b第1、

4、3、5天外周血CD4+T淋巴細胞比例升高（P<0.05），感染第7天外周血CD4+T淋巴細胞比例降低（P<0.05），感染第9天無統(tǒng)計學差異；感染P.b第1、3、5外周血CD8+T淋巴細胞比例降低（P<0.05），感染第7天CD8+T淋巴細胞比例升高（P<0.05），感染第9天無統(tǒng)計學差異。
　　BALB/c小鼠外周血 CD4+、CD8+T淋巴細胞比例與正常對照組比較，感染P.b第1、3天CD4+T淋巴細胞比例升高（P<0.05）

5、，感染第7天CD4+T淋巴細胞比例降低（P<0.05），感染第5、9天外周血CD4+T淋巴細胞比例無統(tǒng)計學差異；感染P.b第1、3天CD8+T淋巴細胞比例降低（P<0.05），感染第7天CD8+T淋巴細胞比例升高（P<0.05），感染第5、9天無統(tǒng)計學差異。
　　SD大鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴細胞比例與正常對照組比較，感染P.b第1天外周血CD4+T淋巴細胞比例升高（P<0.05），感染P.b第3、5、7、9天外周血CD4

6、+T淋巴細胞無統(tǒng)計學差，感染P.b第1天外周血CD8+T淋巴細胞比例降低（P<0.05），感染P.b第3、5、7、9天外周血CD8+T淋巴細胞比例無統(tǒng)計學差異。
　　3.昆明小鼠外周血NK、NKT細胞比例與正常對照組比較，感染P.b第1、3、5天外周血NK細胞比例升高（P<0.05），第7天無統(tǒng)計學差異，第9天外周血NK細胞比例降低（P<0.05）；感染P.b第1、5天外周血NKT細胞比例無統(tǒng)計學差異，第3天外周血NKT細胞比例升

7、高（P<0.05），第7、9天外周血NKT細胞比例顯著降低（P<0.01）。
　　BALB/c小鼠外周血NK、NKT細胞比例與正常對照組比較，感染P.b第1、7天外周血 NK細胞比例無統(tǒng)計學差異，第3、5天外周血 NK細胞比例升高（P<0.05），第9天外周血NK細胞比例顯著降低（P<0.01）；感染P.b第1天外周血NKT細胞比例無統(tǒng)計學差異，第3天外周血NKT細胞比例升高（P<0.05），第5,7,9天外周血NKT細胞比例降低

8、（P<0.05）.
　　SD大鼠外周血NK、NKT細胞比例與正常對照組比較，感染P.b第1天外周血NK細胞比例升高（P<0.05），第3天外周血NK細胞比例顯著升高（P<0.01），第5、7天外周血NK細胞比例升高（P<0.05），第9天外周血NK細胞比例無統(tǒng)計學差異；感染第1天外周血NKT細胞比例升高（P<0.05），第3、5、7、9天外周血NKT細胞比例均顯著升高（P<0.01）。
　　4.昆明小鼠組NO、NOS、Arg

9、inase值與正常對照組比較，感染P.b第1天血清NO值顯著升高（P<0.01），第3、5天無統(tǒng)計學差異，第7、9天血清NO值降低（P<0.05）；感染P.b第1、3、5、7、9天血清NOS無統(tǒng)計學差異；感染P.b第1天血清Arginase值降低（P<0.05），第3、5、7、9天血清Arginase值無統(tǒng)計學差異。
　　BALB/c小鼠組NO、NOS、Arginase值與正常對照組比較，感染P.b第1天血清NO值顯著升高（P<0

10、.01），第3、5天血清NO值無統(tǒng)計學差異，第7、9天血清NO值降低（P<0.05）；感染P.b第1、3、5、7、9天血清NOS值無統(tǒng)計學差異；感染P.b第1、3天血清Arginase值降低（P<0.05），第5、7、9天血清Arginase值無統(tǒng)計學差異。
　　SD大鼠組NO、NOS、Arginase值與正常對照組比較，感染P.b第1、3、5、7、9天血清NO值顯著升高（P<0.01）；感染P.b第1、3、5、7、9天血清NOS

11、無統(tǒng)計學差異；感染P.b第1、3、5、7、9天血清Arginase值均降低（P<0.05）。
　　5.昆明小鼠組血清IFN-γ、IL-4相對表達值與正常對照組比較，感染P.b第1、3、5天血清IFN-γ值升高（P<0.05），第7、9天血清INF-γ值無統(tǒng)計學差異；感染P.b第1天血清 IL-4值無統(tǒng)計學差異，第3、5、7、9天血清IL-4值升高（P<0.05）。
　　BALB/c小鼠組血清 IFN-γ、IL-4與正常對照組

12、比較，感染 P.b第1、3、5天血清IFN-γ值升高（P<0.05），第7、9天血清IFN-γ值無統(tǒng)計學差異；感染P.b第1天血清IL-4值無統(tǒng)計學差異，第3、5、7、9天血清IL-4值顯著升高（P<0.01）。
　　SD大鼠組血清IFN-γ、IL-4與正常對照組比較，感染P.b第1、3、5、7天血清IFN-γ升高（P<0.05），第9天血清IFN-γ無統(tǒng)計學差異；感染P.b第1、3天血清IL-4無統(tǒng)計學差異，第5、7、9天血清I

13、L-4值升高（P<0.05）。
　　6. BALB/c小鼠TLR4、TL9相對表達值與正常對照組比較，感染P.b第1、3、5、7天 TLR4相對表達顯著升高（P<0.01），第9天 TLR9相對表達下降（P<0.05）；感染P.b第1、3天TLR9相對表達無統(tǒng)計學差異，第5天TLR9相對表達顯著升高（P<0.01），第7天TLR9相對表達下降（P<0.05），第9天TLR9相對表達顯著下降（P<0.01）。
　　SD大鼠TL

14、R4、TLR9相對表達值與正常對照組比較，感染P.b第1、3、5、7天TLR4相對表達顯著升高（P<0.01），感染P.b第9天TLR4相對表達無統(tǒng)計學差異；感染P.b第1、3、5、7、9天TLR9相對表達均顯著升高（P<0.01）。結(jié)論:
　　(1)本實驗證實不同鼠類宿主存在易感性差異的現(xiàn)象，昆明小鼠和 BALB/c小鼠無法控制感染而最終死亡，SD大鼠能有效清除瘧原蟲且最終自愈。(2)早期IFN-γ大量的表達以及CD4+T淋巴細

15、胞的比例上升提示Th1類免疫應答反應在抗瘧原蟲感染過程中起重要作用。(3)昆明小鼠和 BALB/c小鼠的 NK、NKT細胞比例先升高后降低，而SD大鼠NK細胞比例升高后維持穩(wěn)定，NKT細胞比例持續(xù)升高，提示大鼠的NK、NKT細胞在清除瘧原蟲過程中起到重要作用，這也許是造成其易感性差異的原因之一(4)昆明小鼠和BALB/c小鼠NO值先升高后降低，而SD大鼠NO值持續(xù)升高，提示大鼠的NO在清除瘧原蟲中起到作用。(5) BALB/c小鼠TLR