約氏瘧原蟲來源的巨噬細胞遷移抑制因子同源分子的功能研究.pdf

1、宿主來源的MIF(Macrophage Migration Inhibitory Factor)分子被發(fā)現(xiàn)在瘧疾感染病理、特別是貧血中發(fā)揮了重要作用。近年來，包括本實驗室在內(nèi)的三個研究小組先后報道了兩個瘧原蟲來源的MIF分子，PlasmodiumfalciparumMlF(PfMIF)和PbergheiMIF(PbMIF)的鑒定和初步功能探討。研究發(fā)現(xiàn)，瘧原蟲來源的MIF分子具有調(diào)節(jié)宿主免疫細胞的活性。然而，瘧原蟲MIF分子的調(diào)節(jié)機制、

2、特別是它和宿主MIF的聯(lián)合效應(yīng)仍然不清楚。本實驗室前期工作還鑒定了另一個瘧原蟲種來源的MIF分子--PyoeliiMIF(PyMIF)，并對其結(jié)構(gòu)和初步活性進行了研究，盡管PyMIF與小鼠MIF分子的氨基酸序列同源性僅為30％左右，但是二者的晶體解析結(jié)構(gòu)高度相似。本論文在實驗室前期工作的基礎(chǔ)上，著重探討PyMIF對靶細胞的調(diào)節(jié)機制，包括其細胞膜受體、是否能夠內(nèi)吞進入細胞、調(diào)節(jié)的信號通路、下游分子、全細胞效應(yīng)、凋亡機制以及動物模型研究等幾

3、個方面。
　　 本論文的研究工作發(fā)現(xiàn)小鼠纖維細胞和巨噬細胞都是PyMIF的靶細胞，并且PyMIF在調(diào)節(jié)信號通路方面與宿主小鼠MIF(MmMIF)相似，它可以活化MAPK/ERK、P13K/AKT信號通路，并抑制AP-1活化，但對JAK/STAT和NF-кB信號通路沒有調(diào)節(jié)作用；重要的是，盡管二者活化信號通路的作用相似，但他們的聯(lián)合作用卻呈現(xiàn)低濃度活化、高濃度抑制的復(fù)雜效應(yīng)。同時，盡管PyMIF和MmMIF都抑制巨噬細胞凋亡，但在

4、機制上也不完全相同:不僅如此，PyMIF明顯調(diào)節(jié)了更多下游信號分子的轉(zhuǎn)錄。在膜受體和內(nèi)吞研究方面，由于受體表達或純化的困難以及蛋白標記方法沒有成功，這部分研究工作目前尚未完成。
　　 在小鼠模型研究中，在不同品系小鼠感染瘧原蟲后均可在外周血檢測到蟲源MIF，并證明蟲源MIF水平與感染蟲血率相關(guān)；并且，尾靜脈注射PyMIF導(dǎo)致感染過程的延長和蟲血率波動，并且上調(diào)了TNF-α和IL-6細胞因子水平；但對感染小鼠配子體出現(xiàn)時間和數(shù)目并

5、無影響。另外，在感染后第6天給藥治療小鼠后，小鼠外周血PyMIF水平先上升一天后迅速下降，至第三天完全消失，為流行地區(qū)現(xiàn)場樣本采集的時間點提供了依據(jù)，也間接提示蟲源MIF有可能作為病程指標。
　　 最后，本研究還比較了三種MIF內(nèi)毒素去除方法，證明本實驗室優(yōu)化的C8反相柱-非復(fù)性法是一種簡單易行、可實驗室規(guī)模應(yīng)用的有效去除少量蛋白質(zhì)內(nèi)毒素的方法，為功能研究提供了重要的技術(shù)支持。
　　 本論文工作對瘧原蟲MIF作用機制研究