約氏瘧原蟲(chóng)來(lái)源的巨噬細(xì)胞遷移抑制因子同源分子的功能研究.pdf

1、宿主來(lái)源的MIF(Macrophage Migration Inhibitory Factor)分子被發(fā)現(xiàn)在瘧疾感染病理、特別是貧血中發(fā)揮了重要作用。近年來(lái)，包括本實(shí)驗(yàn)室在內(nèi)的三個(gè)研究小組先后報(bào)道了兩個(gè)瘧原蟲(chóng)來(lái)源的MIF分子，PlasmodiumfalciparumMlF(PfMIF)和PbergheiMIF(PbMIF)的鑒定和初步功能探討。研究發(fā)現(xiàn)，瘧原蟲(chóng)來(lái)源的MIF分子具有調(diào)節(jié)宿主免疫細(xì)胞的活性。然而，瘧原蟲(chóng)MIF分子的調(diào)節(jié)機(jī)制、

2、特別是它和宿主MIF的聯(lián)合效應(yīng)仍然不清楚。本實(shí)驗(yàn)室前期工作還鑒定了另一個(gè)瘧原蟲(chóng)種來(lái)源的MIF分子--PyoeliiMIF(PyMIF)，并對(duì)其結(jié)構(gòu)和初步活性進(jìn)行了研究，盡管PyMIF與小鼠MIF分子的氨基酸序列同源性僅為30％左右，但是二者的晶體解析結(jié)構(gòu)高度相似。本論文在實(shí)驗(yàn)室前期工作的基礎(chǔ)上，著重探討PyMIF對(duì)靶細(xì)胞的調(diào)節(jié)機(jī)制，包括其細(xì)胞膜受體、是否能夠內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞、調(diào)節(jié)的信號(hào)通路、下游分子、全細(xì)胞效應(yīng)、凋亡機(jī)制以及動(dòng)物模型研究等幾

3、個(gè)方面。
　　 本論文的研究工作發(fā)現(xiàn)小鼠纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞都是PyMIF的靶細(xì)胞，并且PyMIF在調(diào)節(jié)信號(hào)通路方面與宿主小鼠MIF(MmMIF)相似，它可以活化MAPK/ERK、P13K/AKT信號(hào)通路，并抑制AP-1活化，但對(duì)JAK/STAT和NF-кB信號(hào)通路沒(méi)有調(diào)節(jié)作用；重要的是，盡管二者活化信號(hào)通路的作用相似，但他們的聯(lián)合作用卻呈現(xiàn)低濃度活化、高濃度抑制的復(fù)雜效應(yīng)。同時(shí)，盡管PyMIF和MmMIF都抑制巨噬細(xì)胞凋亡，但在

4、機(jī)制上也不完全相同:不僅如此，PyMIF明顯調(diào)節(jié)了更多下游信號(hào)分子的轉(zhuǎn)錄。在膜受體和內(nèi)吞研究方面，由于受體表達(dá)或純化的困難以及蛋白標(biāo)記方法沒(méi)有成功，這部分研究工作目前尚未完成。
　　 在小鼠模型研究中，在不同品系小鼠感染瘧原蟲(chóng)后均可在外周血檢測(cè)到蟲(chóng)源MIF，并證明蟲(chóng)源MIF水平與感染蟲(chóng)血率相關(guān)；并且，尾靜脈注射PyMIF導(dǎo)致感染過(guò)程的延長(zhǎng)和蟲(chóng)血率波動(dòng)，并且上調(diào)了TNF-α和IL-6細(xì)胞因子水平；但對(duì)感染小鼠配子體出現(xiàn)時(shí)間和數(shù)目并

5、無(wú)影響。另外，在感染后第6天給藥治療小鼠后，小鼠外周血PyMIF水平先上升一天后迅速下降，至第三天完全消失，為流行地區(qū)現(xiàn)場(chǎng)樣本采集的時(shí)間點(diǎn)提供了依據(jù)，也間接提示蟲(chóng)源MIF有可能作為病程指標(biāo)。
　　 最后，本研究還比較了三種MIF內(nèi)毒素去除方法，證明本實(shí)驗(yàn)室優(yōu)化的C8反相柱-非復(fù)性法是一種簡(jiǎn)單易行、可實(shí)驗(yàn)室規(guī)模應(yīng)用的有效去除少量蛋白質(zhì)內(nèi)毒素的方法，為功能研究提供了重要的技術(shù)支持。
　　 本論文工作對(duì)瘧原蟲(chóng)MIF作用機(jī)制研究