間日瘧原蟲藥物敏感性體外微量檢測技術(shù)的研究.pdf

1、瘧疾是嚴(yán)重危害人類健康的重要傳染病之一。瘧疾、愛滋病和結(jié)核病一起被世界衛(wèi)生組織列為全球急需控制的三大公共衛(wèi)生問題。在感染人類的四種瘧原蟲中，間日瘧原蟲分布最廣，是非洲以外地區(qū)的主要瘧原蟲蟲種。雖然間日瘧的病死率很低，但由于其存在復(fù)發(fā)特性，使得對間日瘧的控制比對惡性瘧的控制更為困難。 傳染源控制是瘧疾控制的重要措施之一。隨著惡性瘧原蟲對抗瘧藥抗性的產(chǎn)生和擴散，全球瘧疾控制面臨新的挑戰(zhàn)，許多國家特別是非洲國家不得不調(diào)整國家抗瘧藥使用

2、政策并使用價格昂貴的新型抗瘧藥。近年來，世界各地均有間日瘧原蟲對抗瘧藥產(chǎn)生抗性的報道，但由于缺乏適宜的檢測間日瘧原蟲藥物敏感性的方法，我國到目前為止尚沒有間日瘧原蟲對抗瘧藥產(chǎn)生抗性的相關(guān)資料。 經(jīng)典的體內(nèi)瘧原蟲藥物敏感性檢測方法需要追蹤觀測病人28天以上，不適合大規(guī)模用于對不需住院治療的間日瘧病人的藥物敏感性檢測。同時，由于間日瘧原蟲體外培養(yǎng)的技術(shù)難題尚未解決，目前的惡性瘧原蟲體外微量藥敏檢測方法也無法直接用于間日瘧原蟲抗性的檢

3、測。近年來，我國中部瘧疾流行區(qū)出現(xiàn)較大范圍的間日瘧疫情回升和局部暴發(fā)流行。該地區(qū)是我國的主要間日瘧流行區(qū)，曾長時間、大范圍地使用抗瘧藥物，不能排除當(dāng)?shù)卮嬖陂g日瘧原蟲對抗瘧藥物產(chǎn)生抗性的可能性。為了解我國間日瘧原蟲對抗瘧藥物的敏感性情況，了解間日瘧原蟲對抗瘧藥物敏感性與近期我國中部地區(qū)出現(xiàn)的間日瘧疫情回升的相關(guān)關(guān)系，迫切需要建立合適的間日瘧原蟲藥物敏感性測定技術(shù)。 本研究的目的是研究間日瘧原蟲短期體外培養(yǎng)，以建立間日瘧原蟲體外藥物

4、敏感性測定技術(shù)，并對我國中部瘧疾流行區(qū)的間日瘧病例進(jìn)行多種抗瘧藥物的體外藥物敏感性測定，從而了解我國間日瘧原蟲對抗瘧藥的敏感性情況。研究內(nèi)容主要包括： 一、間日瘧原蟲短期體外培養(yǎng)技術(shù)的研究 通過采集間日瘧患者血樣，以改良的McCoy’s 5A為培養(yǎng)液，進(jìn)行紅內(nèi)期間日瘧原蟲短期體外培養(yǎng)技術(shù)研究，以探討影響間日瘧原蟲短期體外培養(yǎng)的因素，分析其適用性及改進(jìn)措施。 二、間日瘧原蟲體外微量藥敏檢測方法的建立 在紅內(nèi)

5、期間日瘧原蟲短期體外培養(yǎng)技術(shù)的基礎(chǔ)上，參照Rieckmann體外微量法，通過觀察不同濃度的氯喹、甲氟喹、乙胺嘧啶、青蒿琥酯、奎寧、哌喹和伯喹對紅內(nèi)期間日瘧原蟲生長發(fā)育的影響，確定相關(guān)的觀察指標(biāo)并初步建立間日瘧原蟲體外微量藥敏檢測方法。 三、我國間日瘧原蟲體外藥物敏感性的初步研究 應(yīng)用新建立的間日瘧原蟲體外藥物敏感性測定技術(shù)，對我國中部瘧疾流行區(qū)的間日瘧病例進(jìn)行多種抗瘧藥物的體外藥物敏感性測定，以了解我國間日瘧原蟲對抗瘧藥

6、的敏感性情況。 研究結(jié)果：通過選用McCoy’s 5A培養(yǎng)液、添加較高濃度的人AB血清、去除人白細(xì)胞等方法，建立了適合間日瘧原蟲短期體外培養(yǎng)的方法，從現(xiàn)癥瘧疾病人采集的間日瘧原蟲蟲株體外連續(xù)培養(yǎng)時間可超過48小時，原蟲生長良好，該短期培養(yǎng)體系可適用于間日瘧原蟲體外藥物敏感性測定技術(shù)的研究。 采取該短期培養(yǎng)體系，通過測定間日瘧原蟲對常用的七種抗瘧藥物（氯喹、甲氟喹、乙胺嘧啶、青蒿琥酯、奎寧、哌喹和伯喹）的藥物敏感性濃度范圍

7、，建立了間日瘧原蟲體外微量藥敏檢測法。 應(yīng)用所建立的間日瘧原蟲體外藥物敏感性微量測定技術(shù)，對我國中部間日瘧流行區(qū)50例門診鏡檢確診的間日瘧病例進(jìn)行了藥物敏感性檢測，成功完成了24例樣本。首次發(fā)現(xiàn)有6例樣本對氯喹的耐藥濃度遠(yuǎn)高于WHO規(guī)定的惡性瘧原蟲抗氯喹標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)論：新建立的間日瘧原蟲體外微量藥敏檢測方法可適用與對間日瘧原蟲藥物敏感性的檢測。在我國中部間日瘧流行區(qū)發(fā)現(xiàn)可能存在間日瘧原蟲抗氯喹株。需要對新建立的間日瘧原蟲體