二甲基甲酰胺對(duì)心肌細(xì)胞炎性損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討二甲基甲酰胺（DMF）是否對(duì)H9c2心肌細(xì)胞造成炎性損傷，同時(shí)探尋是否由于NF-κB信號(hào)通路的激活引發(fā)的炎癥反應(yīng)。
　　方法：不同濃度梯度（0mM，50mM，100mM，200mM）DMF染毒心肌細(xì)胞12h和200 mM DMF染毒不同時(shí)間后（0h，2h，4h，6h，8h，12h），用LDH、CK、CK-MB試劑盒分別檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的LDH、CK、CK-MB，用TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8 Elisa

2、試劑盒檢測(cè)不同濃度（0mM，50mM，100mM，200mM）DMF作用心肌細(xì)胞后炎癥因子釋放量以及200 mM DMF染毒不同時(shí)間后（0h，2h，4h，6h，8h，12h）心肌細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)上清液中炎癥因子 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平；采用活性氧（ROS）試劑盒檢測(cè)200 mM DMF染毒不同時(shí)間后（0h，2h，4h，6h，8h，12h）心肌細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平；用western blotting（WB）檢測(cè)200 m

3、M DMF染毒不同時(shí)間后（0h，2h，4h，6h，8h，12h）心肌細(xì)胞后，細(xì)胞核和細(xì)胞胞漿內(nèi)p65的表達(dá)量，總蛋白中p-ikb的水平；采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法（IFC）對(duì)200 mM DMF染毒不同時(shí)間后（0h，2h，4h，6h，8h，12h）后，細(xì)胞核和胞漿內(nèi)p65的情況。
　　結(jié)果：不同劑量DMF（0 mM，50 mM，100 mM，200 mM）染毒12h后細(xì)胞培養(yǎng)上清液中心肌細(xì)胞損傷指標(biāo)LDH、CK、 CK-MB水平均有升

4、高，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（LDH:F=564.426,P<0.0001;CK:F=938.695，P<0.0001;CK-MB:F=15.636，P=0.001）；LDH、CK和CK-MB的水平在50mM，100mM，200mM染毒組較對(duì)照組高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。心肌細(xì)胞炎癥指標(biāo) TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的水平也均有升高（ TNF-α:F=19.810， P<0.001; IL-1β: F=50.6

5、38， P<0.001;IL-6:F=13.265，P<0.01;IL-8:F=11.521，P<0.001）；50mM和100mM較對(duì)照組TNF水平有所升高，但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；200mM染毒組較對(duì)照組以及其他染毒組TNF水平都有明顯增加，均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.001）；IL-1β水平在50mM，100mM，200mM染毒組較對(duì)照組高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；50mM染毒組較對(duì)照組 IL-6水平有輕微升高，但是

6、組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)。100mM和200mM染毒組較對(duì)照組，IL-6水平均有增加（P<0.05）；各染毒組較對(duì)照組，IL-8均有升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。200 mM DMF染毒不同時(shí)間后（0h，2h，4h，6h，8h，12h）細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LDH、CK、CK-MB水平升高，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（LDH：F=1618.106，P<0.0001；CK：F=609.899， P<0.001；CK-MB：F

7、=119.176，P<0.001）。TNF-α、IL-1β、IL-6水平在染毒后4h較其他各組高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（皆P<0.05），IL-8水平在染毒后2h較其他各組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。200mM DMF染毒不同時(shí)間后，心肌細(xì)胞ROS的水平總體組間存在差異，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=54.722，P<0.001)。2h染毒組活性氧水平最高，與對(duì)照組、其他染毒組相比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。細(xì)胞核內(nèi)p65水

8、平：2h，4h和6h染毒組較對(duì)照組以及8h，12h染毒組顯著升高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；細(xì)胞漿內(nèi)2h染毒組p65水平較對(duì)照組有顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）.2h組與其他染毒組p65水平也有所降低，除了與12h染毒組有差異（P<0.01)，與4h，6h，8h染毒組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？偟鞍字械牧姿峄疘κB，2h、4h、6h染毒組均高于對(duì)照組以及其他染毒組（P<0.05）。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)DMF染毒后2