P-REX2a在胃癌中的表達(dá)及其對(duì)阿霉素耐藥影響的初步研究.pdf

1、目的：檢測(cè)臨床手術(shù)切除的胃癌組織中 P-REX2a的表達(dá)規(guī)律，并探討其在胃癌細(xì)胞阿霉素耐藥中的作用機(jī)制。
　　方法：（1）利用熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR與Western blot檢測(cè)正常組織、癌旁組織、胃癌組織中P-REX2a mRNA和蛋白水平的表達(dá)，并探討其與胃癌TNM分期的聯(lián)系。（2）通過(guò)siRNA技術(shù)干擾胃腺癌細(xì)胞SGC7901中P-REX2a的表達(dá)，利用MTT檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖的影響；聯(lián)合0.3μM阿霉素處理24h，流式檢測(cè)

2、細(xì)胞凋亡，同時(shí)Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bax與Bcl-2的表達(dá)，觀察其對(duì)阿霉素藥物敏感性的影響。（3）Western blot檢測(cè)PTEN/PI3K/Akt通路中PTEN、Akt、p-Akt蛋白表達(dá)，并用以PIP3為底物的定磷比色法測(cè)定PTEN磷酸酶活性，初步探討P-REX2a在細(xì)胞耐藥中的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：（1）在正常胃組織、癌旁組織、胃癌組織中P-REX2a在mRNA和蛋白水平的表達(dá)依次升高（p<0.05）

3、；在胃癌組織中P-REX2a的表達(dá)隨著TNM分期的推后而增多。（2）成功下調(diào)胃腺癌細(xì)胞SGC7901中P-REX2a的表達(dá)后，MTT結(jié)果顯示細(xì)胞增殖能力減弱（p<0.05）；聯(lián)合阿霉素處理時(shí)，相對(duì)于其他組別，下調(diào)組的凋亡率明顯上升（p<0.05），同時(shí)Bax表達(dá)升高、Bcl-2降低（p<0.05）。（3）阿霉素處理下調(diào)P-REX2a的SGC7901細(xì)胞時(shí)，各組PTEN、Akt表達(dá)不變，相對(duì)于對(duì)照組PTEN磷酸酶活性升高（p<0.05），