胃癌相關miRNA的初步鑒定及絲裂霉素對胃癌細胞miRNA表達譜的影響.pdf

1、目的：本研究通過鑒定與不同分化程度人胃癌細胞株密切相關的miRNA，探討了胃癌可能的發(fā)病機制；并初步分析絲裂霉素（MMC）對胃癌細胞miRNA表達譜的影響，為進一步探討MMC治療胃癌的分子機制奠定一定的理論基礎。
　　方法：體外培養(yǎng)中分化人胃癌細胞株SGC-7901、低分化人胃癌細胞株MKN-45及正常胃粘膜上皮細胞GES-1，使用MTT法檢測SGC-7901增殖情況，根據(jù)MTT的結果計算出MMC的IC50濃度來干預SGC-790

2、1；提取各樣本總RNA，并驗證RNA質量，利用miRNA芯片技術，分別檢測分析SGC-7901，MKN-45差異表達的miRNA，及用藥物干預后SGC-7901差異表達的miRNA；采用實時定量RT-PCR對部分miRNA進行驗證；運用DIANAmT，miRanda，miRDB，miRWalk，PICTAR4，PITA，RNA22，RNAhybrid及Targetscan軟件預測miRNA-498可能調控的靶基因。
　　結果：1.

3、與正常胃粘膜細胞GES-1相比，胃癌細胞株SGC-7901及MKN-45中有119個miRNA存在兩倍及以上差異表達，其中SGC-7901有30個miRNA表達上調，25個miRNA表達下調；MKN-45有58個miRNA表達上調，33個miRNA表達下調;MKN-45與SGC-7901的miRNA表達譜有明顯差異。2.MMC與SGC-7901細胞生長抑制率之間有濃度依賴關系，MMC48h的IC50為1.33μmol/L；MMC的IC5

4、0干預48h后的SGC-7901細胞與干預前SGC-7901細胞比較，存在60個差異表達的miRNA，其中miR-498、miR-1247等11個miRNA的表達明顯上調，而在胃癌中的表達明顯下調，另外miR-205*，miR-39242個明顯下調的miRNA，在胃癌中的表達卻是明顯上調的。3.選取miR-33b，miR-498,miR-7,miR-185,miR-3924進行實時定量RT-PCR驗證，其結果與芯片結果一致，證明miRN

5、A芯片結果可靠。4．DIANAmT，miRanda，miRDB，miRWalk，PICTAR4，PITA，RNA22，RNAhybrid和Targetscan軟件分析顯示癌基因MDTH為miR-498的靶基因之一。
　　結論：1.胃癌細胞中存在差異表達的miRNA，且分化程度不同的胃癌細胞中亦存在差異表達的miRNA；2.MMC可以改變SGC-7901細胞中部分miRNA的表達水平；3.MMC對包括miR-498在內的這些miRN