Nephrin在阿霉素腎病大鼠腎組織中的表達(dá)以及霉酚酸酯對(duì)其的影響.pdf

1、目的：
　　 以阿霉素腎病大鼠建立微小病變腎病模型，以霉酚酸酯（MMF）進(jìn)行干預(yù)，檢測(cè)大鼠腎組織中nephrin的表達(dá)。探討足細(xì)胞損傷產(chǎn)生蛋白尿的機(jī)制以及MMF的治療作用。
　　 方法：
　　 將36只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為3組：A組（阿霉素腎病組）、B組（霉酚酸酯干預(yù)組）、C組（正常對(duì)照組），各組均12只。A組、B組大鼠于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)（0天）按Bertain方法制作腎病模型，即一次性尾靜脈注射阿霉素6.5m

2、g/kg，C組尾靜脈注射等量生理鹽水。B組大鼠于注藥次日（實(shí)驗(yàn)第1天）開(kāi)始MMF灌胃，按劑量20m/（kg-d），每日1次，共28天；同時(shí)A組、C組大鼠每日予0.4ml生理鹽水灌胃。將各組大鼠于實(shí)驗(yàn)第0、7、14、21、28天置于代謝籠，收集24小時(shí)尿液，測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量。各組于實(shí)驗(yàn)第14、21、28天分別處死大鼠4只，取腎皮質(zhì)，一部分5％戊二醛固定，透射電鏡觀(guān)察足細(xì)胞變化；一部分常規(guī)4％多聚甲醛固定，做石蠟切片，HE染色光鏡檢查，

3、免疫組化方法檢測(cè)腎組織內(nèi)nephrin水平。采用MetaMorph offline顯微圖像分析系統(tǒng)對(duì)腎小球免疫組化結(jié)果進(jìn)行半定量分析，計(jì)算nephrin陽(yáng)性表達(dá)的相對(duì)含量。數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示；多組資料間比較采用方差分析（One-Way ANOVA），各組間具備方差齊性，兩兩間比較采用LSD方法；對(duì)有相關(guān)趨勢(shì)的變量采用Pearson相關(guān)分析。P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：<

4、br>　　 實(shí)驗(yàn)第14天，A組和B組腎病模型制作成功。①體重：實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)三組大鼠體重?zé)o顯著性差異。從第7天至觀(guān)察結(jié)束，C組大鼠體重隨飼養(yǎng)逐漸增長(zhǎng)，A組和B組體重逐漸下降，與C組的體重變化有顯著性差異；A組與B組之間體重變化無(wú)顯著性差異。②24小時(shí)尿蛋白定量：實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)三組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量無(wú)顯著性差異。從第14天開(kāi)始至觀(guān)察結(jié)束，A組和B組大鼠尿蛋白明顯升高，與C組比較有顯著性差異。A組大鼠在第14天尿蛋白增多，第28天達(dá)高峰；B組

5、大鼠尿蛋白始終低于A(yíng)組，其尿蛋白在第14天開(kāi)始增加，第21天達(dá)高峰，但仍維持較低水平，第28天與第21天相比明顯下降。③病理改變：光鏡觀(guān)察可見(jiàn)A組和B組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)基本正常，與C組相比無(wú)明顯差異。電鏡觀(guān)察可見(jiàn)C組大鼠腎小球基底膜結(jié)構(gòu)完整，上皮細(xì)胞足突清晰；A組大鼠腎小球上皮細(xì)胞足突廣泛融合；B組大鼠腎小球上皮細(xì)胞足突部分融合，與A組相比病變較輕。④nephrin蛋白表達(dá)相對(duì)含量：免疫組化結(jié)果提示在第14天開(kāi)始，A組和B組大鼠nephr

6、in蛋白表達(dá)明顯下調(diào)，與C組比較有顯著性差異；B組大鼠nephrin蛋白表達(dá)明顯高于A(yíng)組，有顯著性差異。⑤nephrin與蛋白尿排泄量相關(guān)分析：大鼠腎小球nephrin陽(yáng)性表達(dá)含量與24小時(shí)尿蛋白排泄量呈負(fù)相關(guān)，隨著尿蛋白的恢復(fù)，ncphrin的表達(dá)亦逐漸恢復(fù)。
　　 結(jié)論：
　　 腎小球足細(xì)胞損傷時(shí)，足細(xì)胞內(nèi)nephrin表達(dá)下調(diào)，隨病情好轉(zhuǎn)而表達(dá)恢復(fù)，nephrin的表達(dá)與尿蛋白呈負(fù)相關(guān)。MMF可以減輕足細(xì)胞損傷，增